С шести лет занимался в полтавской ДЮСШ «Ворскла». В возрасте 12 лет, по совету первого тренера Александра Горностаева, решил попробовать свои силы в днепропетровском спортинтернате. Руслан прошёл отбор и в итоге оказался в дубле «Днепра», позже попал в первую команду. В Высшей лиге дебютировал 7 ноября 1999 года в домашней игре против «Кривбасса» (1:0). С приходом в «Днепр» Евгения Кучеревского стал твёрдым игроком основы, выиграв с командой «бронзу» чемпионата.
«Динамо» (Киев)
Летом 2005 года Ротань перешёл в киевское «Динамо». Он сразу получил постоянное место в основе. Но второй сезон в киевской команде стал не самым лучшим в клубной карьере Руслана — Ротань потерял место в основе, получил несколько очень неприятных травм, не имел постоянной игровой практики и, в итоге, ушёл из «Динамо», проведя за команду 50 матчей и выиграв чемпионат и два Кубка.
«Днепр»
Зимой сезона 2007/08 Ротань вернулся в «Днепр»[3]. Первое появление в составе «новой старой» команды сопровождалось овацией. После возвращения в родной клуб стал основным полузащитником команды, а вскоре — и её капитаном. Получил приз «За лучший гол 2012 года в чемпионате Украины» от программы «ПроФутбол[укр.]»[4]. 1 марта 2014 года, в матче против «Севастополя», Ротань провёл свой 300-й поединок в чемпионате Украины, в том числе — 250-й за «Днепр»[5].
В 2015 году с днепропетровской командой вышел в финал Лиги Европы УЕФА. На 44-й минуте финального матча Ротань отличился голом со штрафного, но «Днепр» уступил со счётом 2:3. Вошёл в символическую сборную турнира[6].
11 мая 2016 года, после проигранного «Днепром» второго матча полуфинала Кубка Украины против «Зари» Ротань ударил арбитра, за что получил полугодичную дисквалификацию[7], впоследствии сокращённую до 3 месяцев[8]. В августе того же года, после многочисленных слухов о его уходе из «Днепра», подписал новый контракт с днепропетровским клубом по схеме «2+1»[9].
20 июля 2016 года, выйдя на поле в матче с «Волынью» стал рекордсменом по количеству проведённых за «Днепр» официальных матчей (416), обойдя Романа Шнейдермана[10].
Матч со «Звездой», состоявшийся 7 мая 2016 года, стал для Руслана 350-м матчем в чемпионате Украины, в том числе — 300-м за «Днепр»[11].
Летом 2017 года, как и практически все игроки, покинул «Днепр».
«Славия» (Прага)
Летом 2017 года подписал годичное соглашение с пражской «Славией»[12].
Возвращение в «Динамо»
12 января 2018 года Руслан Ротань стал игроком киевского «Динамо», подписав контракт до конца сезона 2017/18[13]. Летом 2018 года покинул команду[14].
Карьера в сборной
Дебютировал в сборной, под руководством Леонида Буряка, 12 февраля 2003 года в матче Турция — Украина (0:0).
В первой игре отбора на Чемпионат мира 2006 с Казахстаном гол Руслана в компенсированное время принёс украинской команде важнейшую победу. А в последней игре отбора точным ударом Руслан принёс ничью в выездном поединке с Грузией, и именно эта ничья вывела Украину на мундиаль, где она дошла до четвертьфинала турнира.
После завершения карьеры Андрея Шевченко стал вице-капитаном сборной Украины, а после ухода из сборной Анатолия Тимощука стал капитаном. 27 марта 2018 года — товарищеский матч против сборной Японии (2:1) стал сотым для Ротаня в футболке сборной Украины; это достижение сделало его третьим футболистом в истории национальной команды, которым покорился этот результат[15].
Всего за сборную Украины Ротань провёл 100 матчей, забил 8 голов[16].
Отец — Пётр Николаевич Ротань (1956—2020), футболист и тренер, известен по выступлениям за полтавскую «Ворсклу» (1980—1989), тренировал любительскую команду «Новая жизнь» (Андреевка)[25][26].
Мать — Людмила Петровна Ротань (род. 1960).
Бывшая супруга Руслана Ротаня — Мария Михайловна Игнатьева (ныне Фролова) (род. 1982), неоднократный призёр чемпионатов мира и Европы по карате. 9 июня 2006 года, в день открытия чемпионата мира 2006, у Руслана и Марии родилась дочка Ангелина, в 2008 году — сын Богдан, 23 февраля 2010 года у пары родился третий ребёнок — сын Захар[27][28][29]. Развёлся с Марией в 2013 году[30][31].
В 2013 году женился на Кристине Игоревне Раевской (род. 1986). В браке у Руслана и Кристины родилась дочь — Мирослава[32]. В декабре 2017 года у пары родилась ещё одна дочь — Доминика[33]. Кумовьями футболиста являются Евгений Селезнёв и Евгений Коноплянка[34].
У Руслана есть два брата-футболиста: Пётр (род. 1982) и Алексей (род. 1986)[35].