Barfod gikk på Rysensteen Gymnasium 1980–1983, deretter Tidens Højskole 1983–1984. Hun studerte ved Københavns Universitet, der hun ble cand.jur. i 1992.
Hun har arbeidet i en rekke danske advokatfirmaer, og har ved siden av vært veileder i strafferett for studenter ved Københavns Universitet. Hun har samarbeidet med Dansk Magisterforening, Danmarks Jurist- og Økonomforbund, Gymnasieskolernes Lærerforening med flere om rådgivning av deres medlemmer i spørsmål om studiegjeld. Dessuten har hun vært advokat for diverse alternative og økologiske foreninger, fond og virksomheter, samtidig som hun har drevet ordinært advokatarbeid som eiendomshandel og testamenter.
Barfod var formann for Fælles Kurs Ungdom fra 1984 til 1985 og faglig sekretær for Kommunistiske Studenter fra 1987 til 1989.
Hun stilte som folketingskandidat for Enhedslisten i 1996, og var midlertidig folketingsmedlem første gang fra 8. oktober 1998 til 30. november 1998. Deretter ble hun valgt for periodene 2001 til 2005, 2005 til 2007 og 2007 til 2011. Hun har også vært medlem av partiets hovedstyre fra 1998 til 2002, 2003 til 2005 – og sitter også i styret i dag (2013).
Andre tillitsverv
Line Barfod har hatt en rekke tillitsverv, blant annet som:
medlem av presidiet og økonomiutvalget i Studenterrådet ved Københavns Universitet, 1989-90
medlem av styret for DIS-Fonden 1990-1992
formann for Studenterbogladens Fond, 1991-1997
formann for Foreningen Kulturbyens Venner 1994-1998
medlem av representantskapet i Boligfonden for enlige mødre og fædre fra 1997
medlem av redaksjonskomiteen for Advokatsamfundets rettspolitiske tidsskrift Lov & Ret 1997 -2005
medlem av representantskapet for pengeinstituttet Fælleskassen 2000 – 2006
medlem av styret for Det Lille Teater fra 2007
medlem av styret for Dokumentations- og rådgivningscenteret om racediskrimination fra 2009
.svg)