Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης

Ειδικοί σωλήνες PCR, όπου σε κάθε ένα πραγματοποιείται μία αντίδραση όγκου 100 μL.
Ειδικά μηχανήματα (θερμοκυκλωτές) για τη διεξαγωγή τεστ αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης.

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (αγγλ. PCR, εκ του polymerase chain reaction) είναι μία μέθοδος βιοχημείας και μοριακής βιολογίας για την απομόνωση και τον πολλαπλασιασμό μίας αλληλουχίας DNA, μέσω της ενζυμικής αναπαραγωγής του DNA χωρίς τη χρήση ζωντανών μικροοργανισμών, όπως το βακτήριο E. coli ή οι ζύμες.[1]

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι μία in vitro μέθοδος που μπορεί να πραγματοποιηθεί χωρίς περιορισμούς στη μορφή του χρησιμοποιούμενου DNA. Μπορεί ακόμα να διαφοροποιηθεί εκτενώς για την πραγματοποίηση ποικίλων μεθόδων γενετικής επέμβασης. Με τη χρήση της, συγκεκριμένα θραύσματα DNA μπορούν να κλωνοποιηθούν σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα απουσία ζωντανών κυττάρων.

Αντίδραση πολυμεράσης

Με την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μια συγκεκριμένη περιοχή του γονιδιώματος μπορεί να πολλαπλασιαστεί μέχρι και δισεκατομμύρια φορές, δεδομένου ότι είναι γνωστή η νουκλεοτιδική του αλληλουχία.[2] Η αλληλουχία του γονιδίου (ή «θραύσματος DNA») είναι απαραίτητη για το σχεδιασμό των συνθετικών DNA ολιγονουκλεοτιδίων, το καθένα συμπληρωματικό με μία από τις αλυσίδες του δίκλωνου DNA. Τα ολιγονουκλεοτίδια που θα χρησιμοποιηθούν ως εκκινητές πρέπει να δεσμεύονται σε θέσεις αντίθετες από την αλληλουχία που πρόκειται να ενισχυθεί, με άλλα λόγια καθορίζουν τα άκρα του θραύσματος DNA που πρόκειται να ενισχυθεί.

Στάδια

Ένας πλήρης κύκλος μιας αντίδρασης αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης περιλαμβάνει τρία στάδια:

  • Αποδιάταξη του DNA (denaturation)
  • Προσαρμογή των εκκινητών στο DNA εκμαγείο (annealing)
  • Επιμήκυνση των εκκινητών (extension).

Ένας πλήρης τέτοιος κύκλος περιλαμβάνει επώαση των δειγμάτων σε τρεις διαφορετικές θερμοκρασίες και γίνεται στις μέρες μας αυτόματα από ειδικά μηχανήματα, τους θερμοκυκλωτές (thermal cyclers). Σε μια τυπική αντίδραση, το δίκλωνο DNA αποδιατάσσεται με θέρμανση στους 95°C. Στη συνέχεια, οι εκκινητήρες σε περίσσια προσαρμόζονται με υβριδισμό στις συμπληρωματικές αλληλουχίες του DNA εκμαγείου με μείωση της θερμοκρασίας του δείγματος στους 50-60°C. Ακολουθεί επώαση στους 72°C για την επιμήκυνση των εκκινητών από μία θερμοάντοχη πολυμεράση, παρουσία των τεσσάρων νουκλεοτιδίων.

Καθώς η διαδικασία επαναλαμβάνεται, οι νεοσύστατοι κλώνοι με τη σειρά τους χρησιμοποιούνται ως εκμαγεία για την in vitro σύνθεση του DNA. Μετά από μερικούς κύκλους το επικρατές προϊόν είναι ένα DNA θραύσμα που το μέγεθος του οποίου αντιστοιχεί στην μεταξύ των δύο αρχικών εκκινητήρων απόσταση. Στη πράξη 20 με 30 κύκλοι της αντίδρασης είναι αρκετοί για την αποτελεσματική ενίσχυση του DNA θραύσματος. Σε κάθε κύκλο που διαρκεί περίπου πέντε λεπτά η ποσότητα του DNA διπλασιάζεται. Η όλη διαδικασία κλωνοποίησης ενός DNA θραύσματος σε ένα in vitro σύστημα (χωρίς κύτταρα) διαρκεί μερικές ώρες, σε σχέση με τις μερικές μέρες που απαιτούνται για τις in vivo διαδικασίες κλωνοποίησης.[3]

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR).
Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR).

Χρήσεις και παραλλαγές

Η PCR είναι εξαιρετικά επιλεκτική και ευαίσθητη μέθοδος, έχει δυνατότητα ανίχνευσης ενός και μόνο μορίου DNA σε ένα μείγμα.

Η τεχνολογία PCR αντικαθιστά τον υβριδισμό κατά Southern για τη διάγνωση γενετικών ασθενειών και για την ανίχνευση λοιμωδών νόσων (ιογενών ή μικροβιακών λοιμώξεων κτλ.). Επιπλέον, στην ιατροδικαστική από ένα απλό ίχνος αίματος ή άλλων ιστών (ακόμα και από ένα κύτταρο) μπορεί να αναγνωριστεί η ταυτότητα ενός ατόμου (γενετικό αποτύπωμα – genetic fingerprint). Τέλος, η PCR βρίσκει εφαρμογή και στην Παλαιοντολογία, αφού με την βοήθειά της μπορούμε να πολλαπλασιάσουμε DNA που έχει απομονωθεί από απολιθώματα.[4]

Επιπρόσθετα, μικροποσότητες RNA μπορούν να αναλυθούν με τον ίδιο τρόπο, μετά την αντίστροφη μεταγραφή τους σε DNA από το ένζυμο της ανάστροφης τρανσκριπτάσης (RT-PCR – reverse transcription PCR). Πιο πρόσφατα, κατά τη διάρκεια της πανδημίας του κορωνοϊού 2019-21, η παραλλαγή RT-PCR της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για την ανίχνευση του ιϊκού γενετικού υλικού (RNA) και θεωρείται πολύ αξιόπιστη μέθοδος.[5]

Αναφορές

  1. J. M. Berg· J. L. Tymoczko· G. J. Gatto· L. Stryer (2015). Βιοχημεία. Πανεπιστημιακές Εκδόσεις Κρήτης. σελ. 148-149. [νεκρός σύνδεσμος]
  2. «Polymerase Chain Reaction (PCR) Fact Sheet». Genome.gov. 9 Μαρτίου 2019. Ανακτήθηκε στις 6 Ιουλίου 2021. 
  3. «Αρχειοθετημένο αντίγραφο». Αρχειοθετήθηκε από το πρωτότυπο στις 11 Σεπτεμβρίου 2007. Ανακτήθηκε στις 4 Σεπτεμβρίου 2007. 
  4. palaeo-electronica.org https://palaeo-electronica.org/2002_2/editor/r_and_p.htm. Ανακτήθηκε στις 5 Ιουλίου 2021.  Missing or empty |title= (βοήθεια)
  5. «COVID-19 diagnostic testing». Mayo Clinic. 6 Μαΐου 2021. Ανακτήθηκε στις 6 Ιουλίου 2021. 

Εξωτερικοί σύνδεσμοι


Read other articles:

Religious practices in Japan Religious believers in Japan (CIA World Factbook)[3] Shinto   70.5% Buddhism   67.2% Christianity   1.5% Other religions   5.9% Total adherents exceeds 100% because many Japanese people practice both Shinto and Buddhism. Religion in Japan (2018 NHK research)[4] No religion   62% Buddhism   31% Shinto   3% Christianity   1% Others   1% No answer   2% A ritual at the Takachiho-gawara, the sa...

 

Community area in Chicago Community area in Illinois, United StatesGage ParkCommunity areaCommunity Area 63 - Gage ParkGage Park branch of Chicago Public Library on 55th Street.Location within the city of ChicagoCoordinates: 41°47.4′N 87°41.4′W / 41.7900°N 87.6900°W / 41.7900; -87.6900Country United StatesState IllinoisCountyCookCityChicagoNeighborhoods list Gage ParkMarquette ManorGlendaleGarfield Manor Area • Total2.24 sq mi (5...

 

Halaman ini diarsipkan secara otomatis oleh HsfBot (lihat instruksi) Halaman ini BUKANLAH bak pasir. Jika Anda ingin mencoba menyunting, gunakanlah bak pasir, yaitu halaman yang disediakan khusus untuk uji coba menulis dan menyunting di Wikipedia. Halo, Ariandi Lie. Selamat datang di Wikipedia bahasa Indonesia! Memulai Bacalah halaman Pengantar Wikipedia terlebih dahulu. Baca juga informasi tentang berkontribusi di Wikipedia. Lihat pula aturan yang disederhanakan sebelum melanjutkan. Tips Sel...

Henck Arron Henck Alphonsus Eugène Arron (25 April 1936 – 4 Desember 2000) adalah seorang politikus Suriname yang menjabat sebagai Perdana Menteri Suriname.[1] Pada tahun 1973, Henck Arron memenangkan pemilihan umum di Suriname untuk memperoleh pemerintahan sendiri. Dia adalah kepala kemerdekaan negaranya pada 25 November 1975. Pada tahun 1977 ia diangkat Perdana Menteri, posisi yang dipegangnya sampai tahun 1980. Pada tahun 1980, ia digulingkan oleh kudeta yang diseb...

 

Keuskupan TivoliDioecesis TiburtinaKatolik Katedral TivoliLokasiNegaraItaliaProvinsi gerejawiSubyek langsung Tahta SuciStatistikLuas892 km2 (344 sq mi)Populasi- Total- Katolik(per 2014)185.900 (perkiraan)178,400 (perkiraan) (96%)Paroki84Imam90 (diosesan)32 (Ordo Relijius)InformasiDenominasiGereja KatolikRitusRitus RomaPendirianAbad ke-2KatedralKatedral TivoliKepemimpinan kiniPausFransiskusUskupMauro ParmeggianiSitus webwww.diocesitivoli.it Keuskupan Tivoli (...

 

Music venue in Melbourne, Victoria, Australia 37°51′33.8″S 144°58′38.5″E / 37.859389°S 144.977361°E / -37.859389; 144.977361 George Hotel, home of the Crystal Ballroom The Crystal Ballroom (also known as the Seaview Ballroom and the Wintergarden Room) was a music venue that opened in 1978 in St Kilda, an inner suburb of Melbourne, Victoria, Australia. Located within the George Hotel at 125 Fitzroy Street, it has often been referred to as the epicentre of Me...

Сельское поселение России (МО 2-го уровня)Новотитаровское сельское поселение Флаг[d] Герб 45°14′09″ с. ш. 38°58′16″ в. д.HGЯO Страна  Россия Субъект РФ Краснодарский край Район Динской Включает 4 населённых пункта Адм. центр Новотитаровская Глава сельского пос�...

 

United States historic placeMilner Arms Apartments(Hotel Stevenson)U.S. National Register of Historic Places View from Martin Luther King, Jr. Blvd.Location40 Davenport StreetDetroit, MichiganCoordinates42°20′50″N 83°3′33″W / 42.34722°N 83.05917°W / 42.34722; -83.05917Built1913ArchitectJoseph P. JogerstArchitectural styleLate 19th And 20th Century Revivals, Georgian RevivalMPSCass Farm MPSNRHP reference No.97001095[1]Added to NRHPSept...

 

斯洛博丹·米洛舍维奇Слободан МилошевићSlobodan Milošević 南斯拉夫联盟共和国第3任总统任期1997年7月23日—2000年10月7日总理拉多耶·孔蒂奇莫米尔·布拉托维奇前任佐兰·利利奇(英语:Zoran Lilić)继任沃伊斯拉夫·科什图尼察第1任塞尔维亚总统任期1991年1月11日[注]—1997年7月23日总理德拉古京·泽莱诺维奇(英语:Dragutin Zelenović)拉多曼·博若维奇(英语:Radoman Bo...

American author Watt KeyBornAlbert Watkins Key, Jr. (1970-10-28) October 28, 1970 (age 53)Tuscaloosa, Alabama, U.S.OccupationWriterNationality AmericanEducationBirmingham–Southern College (BA)Spring Hill College (MBA)Notable worksAlabama Moon,( ISBN 978-0-374-30184-2 (1st edition hardback)[1] Dirt Road Home,[2]Fourmile[3]Notable awardsE.B. White Read-Aloud Award (2007)[4][5][6]SpouseKatie Feore Key (1994–present)Children3 Chi...

 

莎拉·阿什頓-西里洛2023年8月,阿什頓-西里洛穿著軍服出生 (1977-07-09) 1977年7月9日(46歲) 美國佛羅里達州国籍 美國别名莎拉·阿什頓(Sarah Ashton)莎拉·西里洛(Sarah Cirillo)金髮女郎(Blonde)职业記者、活動家、政治活動家和候選人、軍醫活跃时期2020年—雇主內華達州共和黨候選人(2020年)《Political.tips》(2020年—)《LGBTQ國度》(2022年3月—2022年10月)烏克蘭媒�...

 

جمال الدين الغزنوي معلومات شخصية الوفاة سنة 1196   حلب  الحياة العملية تعلم لدى علاء الدين الكاساني  المهنة قاضي شرعي،  وعالم عقيدة  تعديل مصدري - تعديل   كتاب أصول الدين للإمام جمال الدين الغزنوي هو من الكتب المهمة في مدرسة الحنفية الماتريدية حيث يعتبر مؤلفه م...

Head of state and of government of the U.S. state of Oregon Governor of OregonSeal of OregonState flagIncumbentTina Koteksince January 9, 2023Government of OregonStyleThe HonorableResidenceMahonia HallTerm lengthFour years, renewable once in a 12-year periodInaugural holderJohn WhiteakerFormationFebruary 14, 1859 (Constitution of Oregon)Salary$98,600 (2018)[1]WebsiteOfficial website The governor of Oregon is the head of government of Oregon and serves as the commander-in-chief of...

 

For the women's race, see 2015 Gent–Wevelgem (women). Cycling race 2015 Gent–Wevelgem2015 UCI World Tour, race 7 of 28[1]Event poster with previous winner John DegenkolbRace detailsDates29 March 2015[2]Distance239 km (148.5 mi)Winning time6h 20' 55Results  Winner  Luca Paolini (ITA) (Team Katusha)  Second  Niki Terpstra (NED) (Etixx–Quick-Step)  Third  Geraint Thomas (GBR) (Team Sky)← 2014 2016 →...

 

Reflection of YouPoster promosiHangul너를 닮은 사람 Alih Aksara yang DisempurnakanNeoreul Dalm-eun SaramArtiSomeone Who Looks Like You GenreMelodramaPembuatJTBCBerdasarkanSomeone Who Looks Like Youoleh Jung So-hyeonDitulis olehYoo Bo-raSutradaraLim Hyeon-wookPemeranGo Hyun-jungShin Hyun-beenChoi Won-youngKim Sang-hoPenata musikNam Hye-seungNegara asalKorea SelatanBahasa asliKoreaJmlh. episode16ProduksiProduser eksekutifJo Na-hyeonJeong Dae-woongJeong Go-eunProduserPark Jae-samKim...

United States Army general (1930–2022) Robert Wetzel redirects here. For the American limnologist and ecologist, see Robert G. Wetzel. Robert L. WetzelWetzel in the 1980sNickname(s)SamBorn(1930-10-06)October 6, 1930Clarksburg, West Virginia, U.S.DiedJanuary 20, 2022(2022-01-20) (aged 91)Columbus, Georgia, U.S.BuriedFort Benning Main Post CemeteryAllegianceUnited StatesService/branchUnited States ArmyYears of service1952–1986RankLieutenant GeneralCommands held V Corps Fort Bennin...

 

Metro station in Tianjin, China Haiguangsi海光寺General informationOther namesHaiguang TempleLocationNankai District, TianjinChinaOperated byTianjin Metro Co. Ltd.Line(s)     Line 1ConstructionStructure typeUnderground and ElevatedHistoryOpened12 June 2006Services Preceding station Tianjin Metro Following station Anshandaotowards Donggulu Line 1 Erweilutowards Liuyuan Haiguangsi Station (Chinese: 海光寺站), literally Haiguang Temple Station in English, is a...

 

English darts player This biography of a living person relies too much on references to primary sources. Please help by adding secondary or tertiary sources. Contentious material about living persons that is unsourced or poorly sourced must be removed immediately, especially if potentially libelous or harmful.Find sources: Glen Durrant – news · newspapers · books · scholar · JSTOR (January 2017) (Learn how and when to remove this message) Darts playerG...

Cet article est une ébauche concernant les droits de l'homme et l’Islande. Vous pouvez partager vos connaissances en l’améliorant (comment ?) selon les recommandations des projets correspondants. L’Islande est classée comme l'un des premiers pays au monde en ce qui concerne le respect des droits de l'homme dont jouissent ses citoyens, garantis par les articles VI et VII de la constitution du pays. Les élections sont libres et équitables, il n'y a pas de brutalité policière ...

 

Flagge Kuwaits Vexillologisches Symbol: Seitenverhältnis: 1:2 Offiziell angenommen: 7. September 1961 Die Flagge Kuwaits wurde am 7. September 1961 offiziell angenommen und das erste Mal am 24. November offiziell gesetzt. Inhaltsverzeichnis 1 Aufbau und Bedeutung 2 Historische Flaggen 3 Quellen 4 Weblinks Aufbau und Bedeutung Konstruktionsvorlage der Nationalflagge Mit Flaggen geschmückte Schule am Nationalfeiertag Nach der Unabhängigkeit Kuwaits 1961 wurden für die Nationalflagge die pa...