Western blot

 Den här artikeln behöver källhänvisningar för att kunna verifieras. (2019-12)
Åtgärda genom att lägga till pålitliga källor (gärna som fotnoter). Uppgifter utan källhänvisning kan ifrågasättas och tas bort utan att det behöver diskuteras på diskussionssidan.

Western blot, WB, även immunoblot, är en vanlig molekylärbiologisk metod som används inom proteinkemin för att detektera och identifiera specifika proteiner med hjälp av antikroppar. Western blot används i princip vid alla laboratorier som bedriver biomedicinsk och biomolekylär forskning, men även vid klinisk medicinsk diagnostik i vissa sammanhang. Termen är bildad i analogi med Southern blot, som är en liknande metod för att detektera DNA.

Tillvägagångssätt

Det första steget vid en WB-analys är att rena fram proteininnehållet från de celler eller vävnader som ska studeras. För att separera proteinerna från cellernas andra beståndsdelar måste celler och vävnader behandlas innan analys. Vävnadsprover kan brytas ner i en homogenisator eller med ultrasonikering. Celler kan behandlas på samma sätt som vävnader eller lyseras. Lysering av celler sker genom att cellmembranet löses upp med en detergent. Det erhållna lysatet centrifugeras för att separera proteinerna från lipider, cellkärnor och andra cellstrukturer.

Proteinerna i lysatet separeras därefter med SDS-PAGE, en metod som separerar proteiner med avseende på molekylmassa som för proteiner mäts i Dalton (anges oftast med prefixet kilo, kDa). SDS binder och denaturerar proteiner, samt gör dem negativt laddade. Proteinerna får vandra i ett elektriskt fält genom en polyakrylamidgel, där de separerar.

Nästa steg, kallat blotting, är att överföra proteinerna till ett nitrocellulosa- eller polyvinylidendifluoridmembran (PVDF) med hjälp av en elektrisk spänning. När proteinerna har överförts blockas membranet för att förhindra ospecifik bindning av antikropparna till membranets yta. Vanliga blocklösningar görs av bovint serumalbumin (BSA) eller fettfri torrmjölk. Efter blockningen appliceras en specifik antikropp (primär antikropp) på membranet, vars specificitet gör att det binder till proteinet av intresse. Därefter appliceras en sekundär antikropp som binder till den primära antikroppen. Den sekundära antikroppen är länkad till ett enzym vars katalytiska förmåga omvandlar ett substrat till en detekterbar produkt. Produkten kan ses direkt genom ett färgomslag på membranet eller indirekt genom att sända ut kemiluminiscent ljus som kan fångas på ljuskänslig film, ses med CCD-kamera eller med någon typ av phosphorimager.

Externa länkar

Read other articles:

Nikel titanium

Kabel yang terbuat dari nikel titanium. Nikel titanium, juga dikenal sebagai nitinol, adalah logam paduan yang memiliki jumlah atom yang hampir sama dalam suatu bahan. Nama nitinol merupakan singkatan dari nama unsur dan tepat penemuannya yaitu Nickel Titanium Naval Ordnance Laboratorium. Sifat-sifat nikel titanium ditemukan di tempat tersebut pada tahun 1959 oleh W. J. Buehler dan F. Wang. Nikel titanium memiliki massa jenis 6,45 g/cm3 dan konduktivitas panas sebesar 0,19 W/cm.K (austenit) a...

 

F.C. Südtirol-Alto Adige

FC SüdtirolNama lengkapFußball Club Südtirol s.r.l.JulukanBiancorossiBerdiri1974 (sebagai SV Milland Fussball)StadionStadion Druso,Bolzano, Italia(Kapasitas: 3.500)KetuaGerhard ComperManajerPierpaolo BisoliLigaSerie B2022-23ke-6 Kostum kandang Kostum tandang F.C. Südtirol adalah sebuah klub sepak bola Italia dari kota Bolzano, Trentino-Alto Adige/Südtirol, yang berdiri pada 1974 di Brixen (Bressanone) sebagai S.V. Milland. Mereka menggunakan nama yang sekarang sejak 1995 pindah ke Bolzan...

 

Gautham Vasudev Menon

Indian filmmaker Gautham Vasudev MenonMenon in 2017Born (1973-02-25) 25 February 1973 (age 51)Ottapalam, Kerala, IndiaAlma materMookambigai College of Engineering (B.E. in Mechanical Engineering)OccupationsActorfilm directorfilm producerplayback singerscreenwritercomposerYears active1995–presentSpousePreethi MenonHonoursKalaimamani 2020 [1] Gautham Vasudev Menon (born 25 February 1973) is an Indian film director, screenwriter, producer and actor who predominantly work...

Derthona Foot Ball Club 1922-1923

Questa voce sull'argomento stagioni delle società calcistiche italiane è solo un abbozzo. Contribuisci a migliorarla secondo le convenzioni di Wikipedia. Segui i suggerimenti del progetto di riferimento. Voce principale: Derthona Foot Ball Club 1908. Derthona Foot Ball ClubStagione 1922-1923Sport calcio Squadra Derthona Allenatore Oddone Presidente Pietro Bonissone Prima Divisione9º posto nel girone B della Lega Nord. Retrocesso in Seconda Divisione. Maggiori presenzeCampionato:...

 

Brescia Calcio 2007-2008

Voce principale: Brescia Calcio. Brescia CalcioStagione 2007-2008Sport calcio Squadra Brescia Allenatore Serse Cosmi All. in seconda Antonio Palazzi Presidente Luigi Corioni Serie B5º posto PlayoffSemifinale Coppa ItaliaPrimo turno Maggiori presenzeCampionato: Zoboli (37)Totale: Zoboli (38) Miglior marcatoreCampionato: Possanzini (16)Totale: Possanzini (17) StadioStadio Mario Rigamonti Maggior numero di spettatori10 264 vs Messina (5ª giornata) Minor numero di spettatori3 10...

 

Карышев, Николай Александрович

Николай Александрович Карышев Дата рождения 6 (18) декабря 1855(1855-12-18) Место рождения с. Дубровка, Жиздринский уезд, Калужская губерния Дата смерти 6 (19) февраля 1905(1905-02-19) (49 лет) Место смерти Москва Страна  Российская империя Научная сфера экономика и статистика Альма-матер ...

Canischio

CanischioKomuneComune di CanischioNegaraItaliaWilayahPiedmontProvinsiProvinsi Torino (TO)Luas • Total11,7 km2 (45 sq mi)Populasi (Desember 2004) • Total289 • Kepadatan2,5/km2 (6,4/sq mi)Zona waktuUTC+1 (CET) • Musim panas (DST)UTC+2 (CEST)Kode pos10080Kode area telepon0124Situs webSitus web resmi Canischio adalah komune yang terletak di distrik Provinsi Torino, Italia. Kota Canischio memiliki luas sebesar 11.7 km²....

 

Drink industry

Industry that Manufactures and Sells Drinks The drink industry (or drinks industry, also known as the beverage industry) produces drinks, in particular alcoholic beverage, ready to drink and soft drink products.[1] Drink production can vary greatly depending on the product being made. ManufacturingDrinks.com explains that bottling facilities differ in the types of bottling lines they operate and the types of products they can run. Drinks may be bottled in glass, plastic or in can. Inn...

 

Promozione Toscana 1955-1956

Voce principale: Promozione 1955-1956. La Promozione fu il massimo campionato regionale di calcio disputato in Toscana nella stagione 1955-1956. A ciascun girone, che garantiva al suo vincitore la promozione in IV Serie a condizione di soddisfare le condizioni economiche richieste dai regolamenti, partecipavano sedici squadre, ed era prevista la retrocessione delle quattro peggio piazzate, anche se erano possibili aggiustamenti automatici per ripartire fra le appropriate sedi locali le squad...

美国众议院

此條目需要补充更多来源。 (2021年7月4日)请协助補充多方面可靠来源以改善这篇条目，无法查证的内容可能會因為异议提出而被移除。致使用者：请搜索一下条目的标题（来源搜索：美国众议院 — 网页、新闻、书籍、学术、图像），以检查网络上是否存在该主题的更多可靠来源（判定指引）。 美國眾議院 United States House of Representatives第118届美国国会众议院徽章 众议院旗...

 

Specie in extinzione

Specie in extinzionefumetto Disegni di Marc Silvestri e Stjepan Sejic. Titolo orig.Endangered Species Lingua orig.inglese PaeseStati Uniti TestiMike Carey, Cristopher Yost, Christos Gage DisegniScot Eaton, Mark Bagley, Mike Perkins EditoreMarvel Comics Collana 1ª ed. New X-Men nn. 40 - 42[1] X-Factor (vol. 3[2]) nn. 21 - 24 Uncanny X-Men (vol. 1) nn. 488 - 491 X-Men (vol. 2) nn. 200 - 204 X-Men: Endangered Species 1ª edizion...

 

Robert F. Kennedy's speech on the assassination of Martin Luther King Jr.

1968 speech by U.S. Senator Robert F. Kennedy For RFK's prepared, formal response to the assassination, see On the Mindless Menace of Violence. Robert F. Kennedy giving his speech Audio of the speech Problems playing this file? See media help. On April 4, 1968, United States Senator Robert F. Kennedy of New York delivered an improvised speech several hours after the assassination of Martin Luther King Jr. Kennedy, who was campaigning to earn the Democratic Party's presidential nomination, mad...

ملعب تشيرنوموريتس

ملعب تشيرنوموريتسمعلومات عامةالمنطقة الإدارية أوديسا البلد  أوكرانيا موقع الويب stadium.odessa.ua (الأوكرانية) التشييد والافتتاحالافتتاح الرسمي 19 نوفمبر 2011 الاستعمالالرياضة كرة القدم المستضيف تشورنومورتس أوديسا المالك تشورنومورتس أوديسا معلومات أخرىالطاقة الاستيعابية 34٬1...

 

Globe Life Park

Questa voce sugli argomenti stadi di baseball degli Stati Uniti d'America e architetture del Texas è solo un abbozzo. Contribuisci a migliorarla secondo le convenzioni di Wikipedia. Globe Life Park Informazioni generaliStato Stati Uniti Ubicazione1000 Ballpark WayArlington, Texas Inizio lavori1992 Inaugurazione1994 Costo$ 191 milioni ProprietarioCittà di Arlington ProgettoDavid M. Schwarz Architectural Services, Inc.HKS, Inc. Prog. strutturaleWalter P Moore/Datum Informazioni tec...

 

Vol Flagship Airlines 3379

Vol Flagship Airlines 3379 Un British Aerospace Jetstream 32 de American Eagle (N933AE), similaire à celui impliqué dans l'accident. Caractéristiques de l'accident Date13 décembre 1994 TypeDécrochage, perte de contrôle à l'atterrissage CausesErreur de pilotage, graves négligences du commandant de bord SiteMorrisville, Caroline du Nord, États-Unis Coordonnées 35° 50′ 05″ nord, 78° 52′ 01″ ouest Caractéristiques de l'appareil Type d'appareilBr...

Judo at the 1980 Summer Olympics

Judo competition Judoat the Games of the XXII OlympiadVenuePalace of Sports of the Central Lenin StadiumDates27 July to 2 August 1980Competitors182 from 42 nations← 19761984 → Judo at the1980 Summer OlympicsMen60 kg65 kg71 kg78 kg86 kg95 kg+95 kgOpenvte Palace of Sports of the Central Lenin Stadium as it appears today The Judo competition at the 1980 Summer Olympics was the first time that the medal count was not dominated by Japan, since the country joined th...

 

1880 United States presidential election in Connecticut

Election in Connecticut Main article: 1880 United States presidential election 1880 United States presidential election in Connecticut ← 1876 November 2, 1880 1884 →   Nominee James A. Garfield Winfield S. Hancock Party Republican Democratic Home state Ohio Pennsylvania Running mate Chester A. Arthur William H. English Electoral vote 6 0 Popular vote 67,071 64,411 Percentage 50.51% 48.50% County Results Garfield   40-50%   50-...

 

Мережковский, Дмитрий Сергеевич

В Википедии есть статьи о других людях с фамилией Мережковский. Дмитрий Мережковский Д. С. Мережковский, 1890-е годы Имя при рождении Дми́трий Серге́евич Мережко́вский Псевдонимы Д. М.[1] Дата рождения 2 (14) августа 1865[2][3] Место рождения Санкт-Петербург, Российска�...

Jean Minjoz

Jean Minjoz Jean Minjoz vers 1946-1947. Fonctions Député français 6 novembre 1945 – 5 décembre 1958(13 ans et 29 jours) Élection 21 octobre 1945 Réélection 2 juin 194610 novembre 194617 juin 19512 janvier 1956 Circonscription Doubs Législature Ire Constituante IIe Constituante Ire, IIe et IIIe (Quatrième République) Groupe politique SOC Maire de Besançon 1953 – 1977(24 ans) Élection Municipales de 1953 Réélection 1959, 1965 et 1971 Prédécesseur Henri Regnie...

 

Cárdenas, Cuba

Municipality in Matanzas, CubaCárdenas San Juan de Dios de CárdenasMunicipalityStreet in Cárdenas Coat of armsMotto: Primus In CubaCárdenas municipality (red) within Matanzas Province (yellow) and CubaCoordinates: 23°02′34″N 81°12′13″W / 23.04278°N 81.20361°W / 23.04278; -81.20361CountryCubaProvinceMatanzasFounded1828[1]Established1859Area[2] • Total577.88 km2 (223.12 sq mi)Elevation10 m (30 ft)P...