Dihidroksiaseton fosfat wujud pada laluan metabolisme glikolisis, dan merupakan salah satu daripada dua produk pemecahan fruktosa 1,6-bifosfat, bersama-sama dengan gliseraldehid 3-fosfat. Ia mengalami pengisomeran dengan cepat dan boleh bertukar balik kepada gliseraldehid 3-fosfat.
Dalam kitaran Calvin, DHAP ialah salah satu produk penurunan enam kali ganda 1,3-bisfosfogliserat oleh NADPH. Ia juga digunakan dalam sintesis sedoheptulosa 1,7-bisfosfat dan fruktosa 1,6-bisfosfat, kedua-duanya digunakan untuk memperbaharui ribulosa 5-fosfat, karbohidrat "kunci" kitaran Calvin.
DHAP juga merupakan hasil penyahhidrogenan L-gliserol-3-fosfat, yang merupakan sebahagian daripada kemasukan gliserol (daripada trigliserida) ke dalam glikolisis. Sebaliknya, penurunan DHAP yang diperoleh daripada glikolisis kepada L-gliserol-3-fosfat menyediakan sel adipos dengan tulang belakang gliserol teraktif yang diperlukan untuk mensintesis trigliserida baharu. Kedua-dua tindak balas dimangkinkan oleh enzim gliserol-3-fosfat dehidrogenase dengan NAD+/NADH sebagai kofaktor.
DHAP juga mempunyai peranan dalam proses biosintesis eter-lipid dalam parasit protozoa Leishmania mexicana.
DHAP ialah anion pelolor 2-oxopropanal. Penukaran ini adalah asas laluan bioteknologi berpotensi kepada bahan kimia komoditi, 1,2-propanediol.[3]