Nile blue

Den kemiske struktur af Nile Blue
Model af Nile Blue

Nile blue, Nile blue A eller Nilblå er et fluorescerende farvestof, der bruges meget til farvning af snit til mikroskopi i biologi og histologi, da det kan bruges både til levende og fixerede celler for at give en blå farve til cellekernen. Farvestoffet bruges også til fluorescensmikroskopi, da det fluorescerer stærkt og reagerer med polyhydroxybutyrate-granula i prokaryote såvel som eukaryote celler.

Ved kogning af Nile blue med svovlsyre produceres Nile red (også kaldet Nile blue oxazone) der også har en stærk fluorescens.

Nile blue hydrochlorid i vand.
Koncentrationer (fra venstre): 1000 ppm, 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm, 0,1 ppm.
Nile blue i vand.
Fra venstre: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14.
Nile blue i vand (underfasen) og i ethylacetat (overfasen) idagslys.
Fra venstre: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14
Nile blue i vand (underfasen) og i ethylacetat (overfasen) i UV-lys (366 nm).
Fra venstre: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14
Nile blue (fri base) i dagslys (øverst) og i UV-lys (366 nm, nederst) i forskellige opløsningsmidler.
Left to right: 1. methanol, 2. ethanol, 3. methyl-tert-butylether, 4. cyclohexan, 5. n-hexan, 6. acetone, 7. tetrahydrofuran, 8. ethylacetat, 9. dimethylformamid, 10. acetonitril, 11. toluen, 12. chloroform

Kemiske og fysiske egenskaber

Nile blue er et fluorescerende farvestof. Fluorescensen viser sig særlig i upolære opløsningsmidler.[1] Absorptionsmaxima af den absorberede elektromagnetiske stråling og emissionsmaxima af de emiterede synlige lys er stærkt afhængig af både pH og det anvendte opløsningsmiddel:[1]

Opløsnings-
middel		 Absorptions-
maksimum
λ (nm)		 Emissions-
maksimum
λ (nm)
Toluen 493 574
Acetone 499 596
Dimethylformamid 504 598
Chloroform 624 647
1-Butanol 627 664
2-Propanol (Isopropanol) 627 665
Ethanol 628 667
Methanol 626 668
Vand 635 674
Saltsyre
(1.0 N, pH = 1.0)		 457 556
Natriumhydroxid
(0,1 N, pH = 11.0)		 522 668
Ammoniakvand
(pH = 13.0)		 524 668


Varigheden af fluorescensen i ethanol er blevet bestemt til 1.42 ns (nanosekund), hvilket er kortere end den tilsvarende værdi for Nile red på 3.65 ns. Varigheden er uafhængig af fortyndingsgraden i området 10−3–10−8 mol/L.[1]

Biologisk forskning

Mikroskopi med Nile blue

Nile blue bruges til differentiel farvning af celler, da det farver neutrale lipider (triglycerider, cholesterolestere og steroider) pink og syrer (DNA, fedtsyrer, chromolipider og phospholipider) blå.[2][3]

DNA-electrophorese

Nile blue bruges også som farvning af DNA i DNA-elektroforese.[4]

Farvning af celler

Se også

Eksterne henvisninger og referencer

  1. ^ a b c Jose, Jiney; Burgess, Kevin (2006). "Benzophenoxazine-based fluorescent dyes for labeling biomolecules" (PDF). Tetrahedron. 62 (48): 11021. doi:10.1016/j.tet.2006.08.056.
  2. ^ Roche Lexikon, accessed 25 June 2007 Arkiveret 26. september 2007 hos Wayback Machine.
  3. ^ 97/647/EG: Entscheidung der EU-Kommission vom 9. September 1997 über ein vorläufiges Versuchsprogramm für Diagnose, Nachweis und Identifizierung von Pseudomonas solanacearum (Smith) Smith in Kartoffeln, accessed 27 June 2007.
  4. ^ "PDF DNA staining protocol for schools, University of Reading" (PDF). Arkiveret fra originalen (PDF) 4. marts 2012. Hentet 6. februar 2014.