Utvrđeno je da gen NDFIP2 sadrži sedam egzona i raspon od 69,8 kb. Promotorska regija ima više mjesta vezivanja za transkripcijske faktore, uključujući NFAT1 (NFATC2) i ELK1.[5][6][7]
Sekvenciranjem klonova dobijenih iz biblioteke cDNK frakcionirane veličine mozga, Hirosawa et al. (1999) klonirali NDFIP2, koji su označili kao KIAA1165. 3' UTR cDNK sadrži kratki isprekidani jedarni element. RT-PCRELISA test otkrio je umjerenu ekspresiju u mozgu, jetri, bubrezima i kimenoj moždini odraslih, te u fetusnom mozgu i jetri. Ekspresija je bila niska u srcu odraslih, skeletnim mišićima, gušterači i jajnicima, s malo ili bez ekspresije u plućima, slezeni i sjemenicima. Visoka ekspresija otkrivena je u kaudalnom jezgru i hipokampusu, s umjerenim nivoima u svim drugim specifičnim regijama mozga. Hirosawa, M., Nagase, T., Ishikawa, K., Kikuno, R., Nomura, N., Ohara, O. Characterization of cDNA clones selected by the GeneMark analysis from size-fractionated cDNA libraries from human brain. DNA Res. 6: 329-336, 1999. PubMed: 10574461</ref>
Analizom mikročipova, Cristillo et al. (2003) identifikovali su NDFIP2, koji su nazvali N4WBP5A, kao gen koji je reguliran nakon aktivacije T-ćelija i snižen imunosupresivnim agensima. Klonirali su N4WBP5A analizom baze podataka i RT-PCR-om ukupne RNKleukocita ljudske periferne krvi. Izvedeni protein od 242 aminokiseline ima izračunatu molekulsku masu od 27,1 kD. Ima tri navodna transmembranska segmenta u C-terminalnoj polovini, dva pretpostavljena motiva vezana za WW bogata prolinom (PPxY), nekoliko mjesta vezivanja SH2 i SH3 i nekoliko mjesta fosforilacijeserina i treonina. Northern blot analiza otkrila je transkript od 4,4 kb u mozgu i plućima te transkripte od 4,4 i 2,4 kb u srcu, skeletnim mišićima, bubrezima, jetri i posteljici. Ekspresija nije otkrivena u leukocitima periferne krvi u mirovanju. Fluorescento označeni i endogeni N4WBP5A kolokaliziran je s Golgijevim markerom i djelimično kolokaliziran s mitohondrijama i markerima endoplazmatskog retikuluma. Western blot analiza otkrila je N4WBP5A, pri prividnoj molekulskoj masi od 29 kD.
Konstas et al. (2002) klonirani mišji N4wbp5a. Mišji i ljudski proteini dijele više od 90% identiteta. Northern blot analiza otkrila je najveću ekspresiju N4wbp5a u mozgu, jetri, bubrezima i testisima miša. Imunohistokemijska analiza bubrega štakora otkrila je N4wbp5a u distalnim izuvijanim tubulama i ćelijama [[sabirni kanaal|sabirnćih kanala, gdje se lokalizirao u citosolu, uglavnom na bazolateralnoj strani. Bojenje je također otkriveno u perijedarnim regijama i unutar struktura nalik vezikulama. Vanjski i unutrašnji medulski sabirni kanali također su pokazali snažno unutarćelijsko obojenje.[9]
Funkcija gena
Koristeći eksperimente koimunoprecipitacije, Cristillo et al. (2003) pokazali su da N4WBP5A stupa u interakciju s WW domenima NEDD4, ubikvitin-ligaze E3. Budući da je N4WBP5A bio pojačano reguliran u aktiviranim T-limfocitima, sugerirali su da N4WBP5A može imati regulatornu ulogu u moduliranju aktivnosti NEDD4 u T-ćelijamaGolgijevog aparata.[10]
Konstas et al (2002) otkrili su da ekspresija sisarskog N4wbp5a u oocitima u rodu Xenopus povećava površinsku ekspresiju amilorid-osjetljivog epitelnog natrijevog kanala (ENaC), smanjenjem brzine pronalaženja ENaC-a. N4wbp5a je spriječio natrijsku povratnu inhibiciju ENaC-a, vjerovatno ometajući regulaciju ENaC-a, posredovanu Nedd4-2 (NEDD4L). Predložili su da N4WBP5A regulira dostupnost i promet NEDD4/NEDD4-2, a Shearwin-Whyatt et al. (2004) pokazali su da su oba PPxY motiva N4wbp5a sisara vezana za WW domen Nedd4 i nekoliko proteina porodice Nedd4. Sveprisutnost N4wbp5a pojačana je Nedd4-om i Nedd4-2, ali ubikvitinacija nije značajno utjecala na promet proteina N4wbp5a. Ektopijskna ekspresija N4wbp5a u HeLa želijama inhibirala je receptor-posredovanu endocitozu obilježenog epidermalnog faktora rasta (EGF), a prekomjerna ekspresija N4wbp5a inhibirala je nakupljanje EGF-a u velikim endocitnim/lizosomnim vezikulama. Shearwin-Whyatt et akl. (2004) predložili su da N4WBP5A djeluje kao adapter za regrutiranje ubikvitin-proteinskih ligaza iz porodice NEDD4 u mehanizmima za promet proteina.[11]
^Konstas, A.-A., Shearwin-Whyatt, L. M., Fotia, A. B., Degger, B., Riccardi, D., Cook, D. I., Korbmacher, C., Kumar, S. Regulation of the epithelial sodium channel by N4WBP5A, a novel Nedd4/Nedd4-2-interacting protein. J. Biol. Chem. 277: 29406-29416, 2002. PubMed: 12050153
^Cristillo, A. D., Nie, L., Macri, M. J., Bierer, B. E. Cloning and characterization of N4WBP5A, an inducible, cyclosporine-sensitive, Nedd4-binding protein in human T lymphocytes. J. Biol. Chem. 278: 34587-34597, 2003. PubMed: 12796489
^Shearwin-Whyatt, L. M., Brown, D. L., Wylie, F. G., Stow, J. L., Kumar, S. N4WBP5A (Ndfip2), a Nedd4-interacting protein, localizes to multivesicular bodies and the Golgi, and has a potential role in protein trafficking. J. Cell Sci. 117: 3679-3689, 2004. PubMed: 15252135
