STS i hibridnim analizama zračenja gen CKLF mapiran u sekvenci u hromosom 16q23. Proizvod ovog gena je citokin. Citokini su mali proteini koji imaju bitnu ulogu u imunskim i upalnim odgovorima. Ovaj gen je jedan od nekoliko gena za hemokinu slične faktore koji se nalaze u grupi na hromozomu 16.
Han et al. (2001) utvrdili su da gen CKLF sadrži četiri egzona. Sve varijante sadrže ekgzone 1 i 4, dok su egzoni 2 i 3 alternativno prerađeni.
Xu et al. (2004) otkrili su da posljednji intron CKLF sadrži promotor za nizvodni gen, CMTM1. Promotor sadrži tipski TATA okvir i više mjesta vezivanja za faktor transkripcije. Analiza luciferaze, potvrdila je funkcionalnost promotora. Northern blot i RT-PCR analize pokazale su da su CKLF i CMTM1, koji su odvojeni sa samo 325 bp, nezavisno eksprimirani.
Zhang et al. (2000) klonirali su CKLF, koji su nazvali HSPC224, iz CD34 pozitivnih hematopoetskihmatičnih /prekursorskih ćelija. Predviđeni protein sa 152 aminokiseline, koji sadrži leucinski zatvarač , snažno je izražen u ćelijskoj liniji promijelocitne leukemije, ali ne i u četiri ostale testirane ćelijske linije.
Korištenjem supresijske suptraktivne hibridizacije za pregled mitogenom stimulirane ćelijske linije ljudskog monocita U937, da bi se identificirali geni koji bi mogli biti inhibirani IL10, nakon čega slijedi RT-PCR, Han et al. (2001) klonirali su četiri varijante CKLF. Izoforme CKLF1, CKLF2, CKLF3 i CKLF4 sadrže 99, 152, 67, odnosno 120 ostataka i dijele uobičajene [[N-kraj|N– i C-terminalne sekvence. Sve četiri izoforme sadrže po tri ostatka cisteina, od kojih su dva organizirana u CC-hemokinskom obrascu. Izoforme CKLF2 i CKLF4 sadrže transmembranske domene kojih nema u CKLF1 i CKLF3. Northern blot analiza ćelija U937 otkrila je transkript od 0,6 kb. RT-PCR ljudskih tkiva pokazao je najvišu ekspresiju CKLF varijanti u slezeni, plucima, sjemenicima, jajnicima, leukocitima periferne krvi, posteljicama i gušterači odraslih, te u fetusnommozgu, skeletnim mišićima, timusu i srcu, sa nižom ekspresijom u ostalim tkivima odraslih i fetusa. Za većinu tkiva nivoi ekspresije CKLF1 i CKLF2 bili su slični i viši od nivoa CKLF4 i CKLF3, koji su pokazali najnižu ekspresiju. Fluorescentna mikroskopija pokazala je difuznu ekspresiju CKLF1 i ekspresiju CKLF2 i CKLF4 pretežno na ćelijskoj periferiji. Western blot analiza otkrila je CKLF1, ali ne i CKLF2 i CKLF4, u supernatantima ćelija, ukazujući da je CKLF1 izlučeni protein.
Funkcija gena
Analizirajući hemotaksičku funkciju, Han i sur. (2001) otkrili su da izoforma CKLF1 privlači neutrofile, monocite i limfocite. CKLF1 je takođe pojačao proliferaciju i diferencijaciju ćelija skeletnih mišića miša.[9][10][11]
^Han, W., Lou, Y., Tang, J., Zhang, Y., Chen, Y., Li, Y., Gu, W., Huang, J., Gui, L., Tang, Y., Li, F., Song, Q., Di, C., Wang, L., Shi, Q., Sun, R., Xia, D., Rui, M., Tang, J., Ma, D. Molecular cloning and characterization of chemokine-like factor 1 (CKLF1), a novel human cytokine with unique structure and potential chemotactic activity. Biochem. J. 357: 127-135, 2001. [PubMed]: 11415443
^Xu, M., Han, W., Qian, M., Ma, X., Ding, P., Wang, Y., Xia, D., Rui, M., Wang, L., Zhang, Y., Ma, D. Last intron of the chemokine-like factor gene contains a putative promoter for the downstream CKLF super family member 1 gene. Biochem. Biophys. Res. Commun. 313: 135-141, 2004. PubMed: 14672709
^Zhang, Q.-H., Ye, M., Wu, X.-Y., Ren, S.-X., Zhao, M., Zhao, C.-J., Fu, G., Shen, Y., Fan, H.-Y., Lu, G., Zhong, M., Xu, X.-R., and 9 others. Cloning and functional analysis of cDNAs with open reading frames for 300 previously undefined genes expressed in CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells. Genome Res. 10: 1546-1560, 2000. [PubMed]: 11042152
Dopunska literatura
Boudinot P, Salhi S, Blanco M, Benmansour A (2002). "Viral haemorrhagic septicaemia virus induces vig-2, a new interferon-responsive gene in rainbow trout". Fish Shellfish Immunol. 11 (5): 383–97. doi:10.1006/fsim.2000.0326. PMID11478515.
Xia D, Li X, Lou Y, et al. (2002). "Overexpression of chemokine-like factor 2 promotes the proliferation and survival of C2C12 skeletal muscle cells". Biochim. Biophys. Acta. 1591 (1–3): 163–173. doi:10.1016/S0167-4889(02)00270-7. PMID12183067.
Ke X, Jia L, Jing H, et al. (2002). "Effects of novel human chemokine-like factor 1 (CKLF1) on bone marrow hematopoietic stem cell/progenitor cell in vitro". Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 23 (6): 301–3. PMID12411060.
Xu M, Han W, Qian M, et al. (2004). "Last intron of the chemokine-like factor gene contains a putative promoter for the downstream CKLF super family member 1 gene". Biochem. Biophys. Res. Commun. 313 (1): 135–41. doi:10.1016/j.bbrc.2003.11.100. PMID14672709.
