Obteve seu mestrado em 1972 e recebeu seu bacharelado em teologia pelo Instituto Teológico "San Giovanni Evangelista" de Palermo em 1974. Formou-se em Pedagogia pela Universidade de Palermo em 1981 e obteve a licenciatura em Direito Canônico no "Angelicum" de Roma em 1985. No mesmo ano recebeu o certificado de Postulador da Congregação para as Causas dos Santos e, em 1987, obteve o doutorado em Direito Canônico.[2]
Bertolone foi professor de religião nas escolas secundárias públicas de Palermo (1972-1984) e capelão no Instituto de Reeducação "Malaspina" para menores problemáticos em Palermo (1975-1980). De 1975 a 1983 foi tesoureiro do Instituto Educacional de Palermo, e serviria como tesoureiro geral (1976-1989) e conselheiro geral (1976-2006). Foi colaborador paroquial de "S. Maria della Perseveranza" em Roma (1983-1987), e também em Roma trabalhou como professor em uma escola administrada pelas Irmãs Ursulinas (1985-1986). Em 1988 tornou-se funcionário da Congregação para os Institutos de Vida Consagrada e Sociedades de Vida Apostólica.[2] Foi nomeado subsecretário pelo Papa João Paulo II em 12 de junho de 2004.[3]
Bertolone tem sido historicamente um forte crítico da máfia siciliana e da 'Ndrangheta, chamando-as de anticristãs e anti-Evangelho, e foi um dos maiores defensores da beatificação de Pino Puglisi (padre morto pela máfia).[4]
