Lou Jacobi nasceu em uma família judia em Toronto. Filho de Joseph e Fay Jacobi.[1] Começou a atuar ainda jovem, fazendo sua estréia nos palcos em 1924 em um teatro de Toronto, tocando violino em The Rabbi and the Priest. Depois de trabalhar como diretor da Bathurst Jewish Community Centre e diretor social em um resort de verão, Jacobi se mudou para Londres para trabalhar no teatro, aparecendo em Guys and Dolls e Pal Joey. Em 1955, Jacobi fez sua estréia na Broadway em The Diary of Anne Frank como Hans van Daan, papel que ele repetiu na versão cinematográfica de 1959. Outras performances na Broadway incluem The Tenth Man (1959), Don't Drink the Water (1966) e a peça de estreia de Neil Simon, Come Blow Your Horn (1961).
Jacobi era um ator convidado em uma variedade de programas de televisão, incluindo Playhouse 90, That Girl e The Man from U.N.C.L.E., e tinha uma participação regular em The Dean Martin Show. Em 1976, ele estrelou a minissérieIvan the Terrible, uma comédia sobre uma família que vivia na União Soviética.
O ator fez uma paródia do álbum gravado pela Capitol Records chamado Al Tijuana and his Jewish Brass em que ele atuou como mestre de cerimônias e maestro da banda de dance que tocava canções como "Downtown".
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