Comme les sous-marins de type II étaient trop petits pour des missions de combat dans l'océan Atlantique, il a été affecté principalement dans la Mer du Nord et la surveillance côtière.
Le , l'U-140 devient opérationnel toujours dans la 1. Unterseebootsflottille à Kiel.
Il appareille le du port de Kiel pour sa première patrouille sous les ordres de l'Oberleutnant zur SeeHans-Peter Hinsch et rejoint Bergen le . Il y coule 3 navires marchands pour un total de 12 410 tonneaux. Il reprend la mer le pour rejoindre Kiel le
Sa deuxième patrouille débute le , sous les ordres de l'Oberleutnant zur See Hans-Jürgen Hellriegel, pour une période de 12 jours le ramenant à Gotenhafen le .
Sa troisième et dernière patrouille de guerre est du 7 au , soit 18 jours en mer avec un score de 1 sous-marin coulé de 206 tonnes.
L'Unterseeboot 140 a coulé 3 navires marchands ennemis pour un total de 12 410 tonneaux et endommagé 1 navire militaire de 206 tonnes au cours des 3 patrouilles (58 jours en mer) qu'il effectua.