Constance de Castille Sancho Manuel de Villena y Castañeda (d) Enrique Manuel de Villena y Castañeda (d) Fernando Manuel de Villena y Núñez de Lara (d)
Depuis cinq ans, son père était un redoutable ennemi d'Alphonse XI, roi de Castille, son ancien protégé, et le roi souhaitait soit neutraliser soit absorber la puissance de la famille de Peñafiel. Même si Juana n'était pas encore l'héritière, elle devait déjà, dès sa jeunesse, se plier aux souhaits du roi. La très influente concubine du roi, Leonor de Guzmán, souhaitait obtenir pour son fils aîné des domaines importants ainsi qu'une alliance avec une famille prestigieuse et s'intéressait pour cela à la jeune Juana. Le , son frère et tuteur, Fernando Manuel de Peñafiel, est contraint d'accepter le mariage de sa jeune sœur avec Henri de Trastamare (1333–79), l'aîné des fils illégitimes d'Alphonse XI.
C'est cependant bien plus tard, après la mort de ses frères sans héritiers, que Juana devient une riche héritière, alors que son mari devenait une menace pour le pouvoir royal. En 1369, il devint le roi Henri II de Castille après avoir déposé et tué son demi-frère Pierre Ier le Cruel.
En 1361, à la mort de sa nièce adolescente Blanche[1], fille de son frère Ferdinand Manuel, elle hérite de Villena, Escalona et Peñafiel[1]. Juana était également une petite-fille maternelle de Juana Núñez de Lara, La Palomilla, et elle hérita de sa cousine Isabel de Lara, assassinée en 1361[2]. Elle hérita également de Lara et de Biscay. En 1369, elle devient reine de Castille et León.
Lorsqu'elle mourut en 1381 et laissa son héritage à son fils, Biscaye est définitivement unie à la Castille puis à l'Espagne. C'est pour cette raison que les basques se souviennent d'elle.
L'impératrice Catherine II de Russie est l'une de ses descendantes (en ligne matrilinéaire directe).
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