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Guy Mathot est le fils de Jules Mathot, permanent syndical FGTB Cockerill Ougrée, et de Simone Mathot, qui fut bourgmestre de Saint-Séverin.
Après avoir obtenu un diplôme de licencié en sciences biologiques (groupe des sciences botaniques) de l'Université de Liège, Guy Mathot se tourna vers la politique.