Matt Keeslar wurde 1972 in Grand Rapids im Bundesstaat Michigan geboren. Er absolvierte die Adrian High School im Jahr 1991 und zog anschließend von Michigan nach New York, um an der Juilliard School of Drama teilzunehmen. Trotz seiner Liebe zum Theater gab er in der Zwischenzeit 1994 auch sein Spielfilmdebüt als Schauspieler in Robert Redfords Filmdrama Quiz Show. Da die Juilliard School ihren Absolventen in Bezug auf Arbeitsbedingungen außerhalb der Schule strenge Regeln auferlegt, verließ Keeslar Juilliard nach seinem dritten Jahr, um sich in der Hauptsache einer Karriere im Filmgeschäft widmen zu können.
Matt Keeslars Film- und Fernsehkarriere umfasst mehr als 40 internationale Kino- und Fernsehfilme sowie Fernsehserien. Außerhalb seiner Filmkarriere etablierte sich eine feste Zusammenarbeit mit dem South Coast Repertory in Costa Mesa in Kalifornien, wo er in Bühnenstücken auftrat und Theaterlesungen veranstaltete.
Matt Keeslar beendete seine Tätigkeit in Film und Fernsehen im Jahr 2010 weitestgehend zu Gunsten einer Karriere in der Wissenschaft. Sein Biologiestudium am Reed College schloss er im Mai 2014 mit einer Diplomarbeit ab, die die Auswirkungen von Anti-Malariamitteln auf Gehirne von Fröschen erforscht. Er arbeitet mittlerweile an der Oregon Health & Science University (Stand: Februar 2021).