TaqMan

Les sondes TaqMan són sondes d'hidròlisi dissenyades per augmentar l'especificitat de la PCR quantitativa. El mètode va ser informat per primera vegada el 1991 per l'investigador Kary Mullis de Cetus Corporation,[1] i la tecnologia va ser posteriorment desenvolupada per Hoffmann-La Roche per a assaigs diagnòstics i per Applied Biosystems (que ara forma part de Thermo Fisher Scientific) per a aplicacions de recerca.

El principi de la sonda TaqMan es basa en l'activitat exonucleasa 5´-3´ de la polimerasa Taq per tallar una sonda de doble marca durant la hibridació a la seqüència objectiu complementària i la detecció basada en el fluoròfor.[2] Com en altres mètodes quantitatius de PCR, el senyal de fluorescència resultant permet mesures quantitatives de l'acumulació del producte durant les etapes exponencials de la PCR; no obstant això, la sonda TaqMan augmenta significativament l'especificitat de la detecció. Les sondes TaqMan van rebre el nom del videojoc Pac-Man (Taq Polymerasa + PacMan = TaqMan), ja que el seu mecanisme es basa en el principi Pac-Man.[3]

Principis

La sonda TaqMan està formada per un fluoròfor unit covalentment a l'extrem 5' d'un oligonucleòtid i un desactivador de fluorescència (quencher) a l'extrem 3' [4] (Figura 1).

Per a aquest mètode hom poden fer servir diferents fluoròfors (ex: 6-carboxifluoresceïna, tetraclorofluoresceïna) i desactivadors de fluorescència (com ara tetrametilrodamina).[5] El «quencher» inhibeix la fluorescència del fluoròfor quan és excitat per la font de llum del termociclador.[5] D'aquesta manera, mentre que el fluoròfor i el quencher estiguin propers l'un a l'altre, no hi haurà senyal fluorescent, ja que el quencher està exercint la seva activitat inhibidora (Figura 1).

Figura 1: Mecanisme d'una sonda TaqMan

Cada sonda TaqMan està dissenyada de manera que hibride amb una regió específica d'ADN que serà amplificada per un parell d'oligonucleòtids específics. A mesura que la Taq polimerasa sintetitza la cadena en sentit 5'- 3 '(usant com a motlle el bri en sentit 3'- 5'), l'activitat exonucleasa 5'-3 'd'aquest mateix enzim degrada la sonda TaqMan ja hibridada a l' ADN. La degradació de la sonda separa el fluoròfor, trencant així la proximitat entre aquest i el quencher, permetent així l'emissió de fluorescència. La fluorescència detectada és directament proporcional a la quantitat de fluoròfor alliberat i, per tant, a la quantitat d'ADN d'interès present en el producte de PCR.

Aplicacions

Els Assaigs basats en sondes TaqMan s'utilitzen en PCR quantitativa en els àmbits de recerca i laboratoris mèdics per:

Referències

  1. ↑ Holland, P. M.; Abramson, R. D.; Watson, R.; Gelfand, D. H. «Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5'----3' exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase». Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 88, 16, 1991, pàg. 7276–7280. Bibcode: 1991PNAS...88.7276H. DOI: 10.1073/pnas.88.16.7276. PMC: 52277. PMID: 1871133.
  2. ↑ TaqMan Gene Expression - NCBI Projects
  3. ↑ The Real-Time TaqMan PCR and Applications in Veterinary Medicine - From PacMan to TaqMan - a computer game revisited Arxivat 2009-05-05 a Wayback Machine.
  4. ↑ [1] TaqMan Probes: Introduction, functioning and applications.
  5. ↑ 5,0 5,1 [2] Holland PM, Abramson RD, Watson R, Gelfand DH, « Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5'----3' exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase », Proc Natl Acad Sci U S A, vol. 88, no 16, 1991, p. 7276-80.
  6. ↑ [3] Assay Design for Bacterial Identification.

Read other articles:

Vinci Malizon

Nama ini menggunakan kebiasaan penamaan Filipina; nama tengah atau nama keluarga pihak ibunya adalah Malizon. VinciMalizon pada tahun 2023LahirGabriel Vincent Tolentino Malizon11 Maret 2000 (umur 23)Santo Tomas, Batangas, FilipinaKebangsaanFilipinaTahun aktif2022–sekarangKarier musikGenrePopInstrumen Vokal Tahun aktif2022–sekarangLabelMLDABS-CBNNama KoreaHangul빈치 Alih AksaraBin ChiMcCune–ReischauerPin Ch'i Tanda tangan Gabriel Vincent Tolentino Malizon (lahir 11 Maret 2000...

 

Paladium

Halaman ini berisi artikel tentang unsur kimia. Untuk kegunaan lain, lihat Paladium (disambiguasi). 46PdPaladiumKristal paladium berukuran 10×5 mm Garis spektrum paladiumSifat umumNama, lambangpaladium, PdPengucapan/paladium/[1] Penampilanputih keperakanPaladium dalam tabel periodik 46Pd Hidrogen Helium Lithium Berilium Boron Karbon Nitrogen Oksigen Fluor Neon Natrium Magnesium Aluminium Silikon Fosfor Sulfur Clor Argon Potasium Kalsium Skandium Titanium Vanadium Chromium Mangan...

 

Alpha Condé

Alpha Condé Presiden GuineaMasa jabatan21 Desember 2010 – 5 September 2021Perdana MenteriJean-Marie DoréMohamed Said FofanaMamady YoulaIbrahima Kassory Fofana PendahuluSékouba Konaté (Penjabat)PenggantiMamady Doumbouya Informasi pribadiLahir4 Maret 1938 (umur 86)Boké, Guinea Prancis(sekarang Guinea)Partai politikMajelis Rakyat GuineaSuami/istriDjene Kaba CondéAlma materUniversitas Pantheon-SorbonneSunting kotak info • L • B Alpha Condé (lahir 4 Maret 1938)...

Daftar Duta Besar Amerika Serikat untuk Togo

Duta Besar Amerika Serikat untuk TogoSegel Kementerian Dalam Negeri Amerika SerikatDicalonkan olehPresiden Amerika SerikatDitunjuk olehPresidendengan nasehat Senat Berikut ini adalah daftar Duta Besar Amerika Serikat untuk Togo Daftar Leland Barrows Leon B. Poullada William Witman II Albert W. Sherer, Jr. Dwight Dickinson Nancy V. Rawls Ronald D. Palmer Marilyn P. Johnson Howard Kent Walker Owen W. Roberts David A. Korn Rush Walker Taylor, Jr. Harmon Elwood Kirby Johnny Young Brenda Schoonove...

 

Pennant (sports)

Commemorative flag used to show support for an athletic team For other uses, see Pennant (disambiguation). The examples and perspective in this article may not represent a worldwide view of the subject. You may improve this article, discuss the issue on the talk page, or create a new article, as appropriate. (November 2021) (Learn how and when to remove this template message) The ritual of hoisting of the premiership flag in Australian sporting culture dates back to 1896, and is an enduring s...

 

Desa Budaya Gamcheon

Artikel ini sebatang kara, artinya tidak ada artikel lain yang memiliki pranala balik ke halaman ini.Bantulah menambah pranala ke artikel ini dari artikel yang berhubungan atau coba peralatan pencari pranala.Tag ini diberikan pada Oktober 2022. Desa Budaya Gamcheon merupakan salah satu tempat bersejarah yang ada di pesisir Busan. Desa inimerupakan bagian dari sejarah modern nasional dan jejak sejarah Korea selatan yang telah dilestarikan sejak awal kehidupan yang sulit dari 6,25 pengungsi pad...

Chris Brown (album)

Chris BrownAlbum studio karya Chris BrownDirilis29 November 2005Direkam2005GenreR&B, hip-hop soulDurasi55:04LabelJive RecordsProduserScott Storch, Jermaine Dupri, Bryan-Michael Cox, WyldCard, The Underdogs, Dre & Vidal, Shea Taylor, Tyler Matthews, Cool & Dre, Sean Garrett, Nick Pope, Hunter AtkinsKronologi Chris Brown Chris Brown(2005) Exclusive(2007)Exclusive2007 Templat:Extra album cover 2 Singel dalam album Chris Brown Run It!Dirilis: 25 Juli 2005 Yo (Excuse Me Miss)Dirili...

 

Canadian Pacific Railway

Class I railroad in Canada and the United States For the successor company, see Canadian Pacific Kansas City. Canadian Pacific redirects here. For other uses, see Canadian Pacific (disambiguation). This article may be too long to read and navigate comfortably. Consider splitting content into sub-articles, condensing it, or adding subheadings. Please discuss this issue on the article's talk page. (October 2022) Canadian Pacific RailwayChemin de fer Canadien PacifiqueCanadian Pacific system map...

 

ソー (オー＝ド＝セーヌ県)

Sceaux 行政国 フランス地域圏 (Région) イル＝ド＝フランス地域圏県 (département) オー＝ド＝セーヌ県郡 (arrondissement) アントニー郡小郡 (canton) 小郡庁所在地INSEEコード 92071郵便番号 92330市長（任期） フィリップ・ローラン（2008年-2014年）自治体間連合 (fr) メトロポール・デュ・グラン・パリ人口動態人口 19,679人（2007年）人口密度 5466人/km2住民の呼称 Scéens地理座標 北緯48度4...

ソー (オー＝ド＝セーヌ県)

Sceaux 行政国 フランス地域圏 (Région) イル＝ド＝フランス地域圏県 (département) オー＝ド＝セーヌ県郡 (arrondissement) アントニー郡小郡 (canton) 小郡庁所在地INSEEコード 92071郵便番号 92330市長（任期） フィリップ・ローラン（2008年-2014年）自治体間連合 (fr) メトロポール・デュ・グラン・パリ人口動態人口 19,679人（2007年）人口密度 5466人/km2住民の呼称 Scéens地理座標 北緯48度4...

 

Guéhébert

Guéhébert La mairie. Administration Pays France Région Normandie Département Manche Arrondissement Coutances Intercommunalité Communauté de communes Coutances Mer et Bocage Statut commune déléguée Maire délégué Mandat Régis Boudier 2020-2026 Code postal 50210 Code commune 50223 Démographie Population 138 hab. (2020) Densité 22 hab./km2 Géographie Coordonnées 48° 58′ 12″ nord, 1° 22′ 24″ ouest Altitude Min. 25 mMax. 121&#...

 

Begoniaceae

Family of flowering plants Not to be confused with Bignoniaceae. Begoniaceae Begonia hirtella Scientific classification Kingdom: Plantae Clade: Tracheophytes Clade: Angiosperms Clade: Eudicots Clade: Rosids Order: Cucurbitales Family: BegoniaceaeC.Agardh[1] Genera Begonia Hillebrandia Range of the family Begoniaceae Begoniaceae is a family of flowering plants with two genera and about 2040 species[2] occurring in the subtropics and tropics of both the New World and Old World.&...

Lubab al-Muhassal

Lubābu l-Muhassal (Gist of the Compendium) AuthorIbn KhaldūnOriginal titleLubab al-Muhassal fi Usul al-DinTranslatorP. Luciano RubioLanguageArabicSubjectIslamic theologyPublisherTetuanPublication date1351Published in English1952 Lubābu l-Muhassal fi Usul al-Din[1] (لباب المحصل في أصول الدين) is a book on Islamic theology by the scholar Ibn Khaldūn, written in around 1351 (752 AH).[2] The book was Khaldūn's first work, written when he was 19&...

 

United States war crimes

War crimes perpetrated by the U.S. and its armed forces Members of the United States Armed Forces have violated the law of war after the signing of the Hague Conventions of 1899 and 1907 and the signing of the Geneva Conventions. The United States prosecutes offenders through the War Crimes Act of 1996 as well as through articles in the Uniform Code of Military Justice. The United States signed the 1999 Rome Statute but it never ratified the treaty, taking the position that the International ...

 

Syamas-syum-ukin

Shamash-shum-ukinRaja BabelRaja Sumer dan AkkadRaja Empat Penjuru BumiRaja Semesta AlamDetail monumen batu Shamash-shum-ukin sebagai pembawa keranjang. 668–655 SM, dari kuil Nabu di Borsippa. Kini disimpan di British Museum.Raja BabelBerkuasa668–648 SMPendahuluEsarhaddonPenerusKandalanuInformasi pribadiKematian648 SMAyahEsarhaddonIbuTidak diketahuo,[1] kemungkinan berdarah Babel.[2]AkkadiaŠamaš-šuma-ukinŠamaš-šumu-ukīn Shamash-shum-ukin atau Shamashshumukin[3 ...

Siege of the Alcázar

Nationalist victory in Toledo (1936) at the opening stages of the Spanish Civil War Siege of the AlcázarPart of the Spanish Civil WarAlcázar of Toledo in 2006DateJuly 21 – September 27, 1936LocationToledo, SpainResult Nationalist victory[1] Siege lifted Nationalists capture ToledoBelligerents Republicans Confederal militias Antifascist Worker and Peasant Militias Fifth Regiment NationalistsCommanders and leaders Maj. Gen. José Riquelme Col. Aureliano Álvarez-Coque Lt. Col. Ricar...

 

Outfront Media

Outdoor advertising company Outfront Media, Inc.Company typePublicTraded asNYSE: OUTRussell 1000 ComponentS&P 600 ComponentIndustryOutdoor AdvertisingFounded1938; 86 years ago (1938)Headquarters405 Lexington Avenue, New York, NY, U.S.Area servedAmericasKey peopleJeremy J. Male (CEO)Matthew Siegel (CFO)ProductsBillboards, Transit AdvertisingRevenue US$ 2.5B (2020)[1]Number of employees2,370 (2020)[2]Websitewww.outfront.com Outfront Media billboard in ...

 

Plasma Physics Laboratory (Saskatchewan)

Physics laboratory at the University of Saskatchewan This article may rely excessively on sources too closely associated with the subject, potentially preventing the article from being verifiable and neutral. Please help improve it by replacing them with more appropriate citations to reliable, independent, third-party sources. (April 2015) (Learn how and when to remove this message) The Plasma Physics Laboratory at the University of Saskatchewan was established in 1959 by H. M. Skarsgard. Ear...

Полярне сяйво

Полярне ся́йво (лат. aurora polaris), також широко відоме як північне сяйво (лат. aurora borealis) та південне сяйво (лат. aurora australis) — оптичне явище світіння окремих ділянок нічного неба в полярних районах, яке швидко змінюється. Виникає у верхніх шарах атмосфери планети під впливо�...

 

De Panne

Disambiguazione – La Panne rimanda qui. Se stai cercando il romanzo di Friedrich Dürrenmatt, vedi La panne. Una storia ancora possibile. Questa voce o sezione sull'argomento centri abitati del Belgio non cita le fonti necessarie o quelle presenti sono insufficienti. Puoi migliorare questa voce aggiungendo citazioni da fonti attendibili secondo le linee guida sull'uso delle fonti. Segui i suggerimenti del progetto di riferimento. De Pannecomune(FR) La Panne(NL) De Panne De Pan...