Madrileny de naixement, va viure a casa dels seus avis fins als tres anys, edat amb la qual es va traslladar amb els seus pares a Leganés. Guarda una estreta relació amb Sacedón (Guadalajara), on va passar la seva joventut,[2] arribant a fer un homenatge a aquesta localitat a El informal.
Va començar a treballar com a conductor d'autobús (ja que era l'ofici del seu pare), més tard va treballar com a vigilant de seguretat fins que els seus amics li van dir que, a causa de la seva habilitat per a l'humor, es presentés al càsting d' Esta noche cruzamos el Mississippi (Telecinco). Així va ser, gràcies als seus personatges Lucas Grijánder i Crispín Klander -tots dos imitacions de l'humorista Chiquito de la Calzada-, com Flo va ser catapultat a la fama. Amb les imitacions d'aquests efeminats analistes del cor, que venien del país inventat de Chiquitistán amb frases com "cuidadín, cuidadín" i "soy modosito", Fernández es va fer molt popular en els 90. Continuaria amb Pepe Navarro a La sonrisa del pelícano (Antena 3).
En juliol de 1998, aconseguí consagrar-se en el programa diari El informal que copresentava junt amb Javier Capitán, on analitzava en to àcid l'actualitat, com a farciment per a l'estiu, i van gaudir de gran popularitat gràcies als seus famosos sketches, vídeos doblats i imitacions, passant de ser un espai de farciment de tot just 20 minuts a encapçalar les llistes de percentatge d'audiència. Aquesta aventura televisiva arribaria a la seva fi a l'abril de 2002. Amb El informal, Florentino Fernández va rebre el TP d'Or al millor personatge revelació de 1999 i va ser finalista al Millor Comunicador de Programes d'Entreteniment 1999 per l'Acadèmia de les Ciències i de les Arts de la Televisió a Espanya (ATV).
El 2003, després del seu pas per 7 Vidas, va aconseguir el seu propi programa nocturn, en el qual faria la labor d'animador-presentador: El show de Flo (La 1), amb la col·laboració de Miki Nadal, el seu company d' El informal. Encara que el programa no va tenir l'èxit esperat per la cadena, la seva carrera va conèixer nous èxits, ja fos com a monologuista a El club de la comedia o com a actor als escenaris, en l'obra de teatre 5hombres.com.
El 2004 tornaria a fer un programa informatiu en clau d'humor, en aquesta ocasió al costat de Nuria Roca en UHF, en les nits d'Antena 3. Encara que el projecte tenia com a objectiu restar audiència a Telecinco, que dominava la programació de mitjanit amb Crónicas marcianas, els resultats no van ser els esperats i el programa es va cancel·lar. Ja el 2005 va presentar i va actuar en el programa de sketches de TVE 1: Splunge al costat de, entre altres, els seus excompanys d' El informalPatricia Conde i Miki Nadal celebrada a Astorga l'agost de 2010.
També va treballar a La Sexta: El Club de Flo. Amb l'ajuda de Agustín Jiménez, Bermúdez, Luisa Martín i Goyo Jiménez el programa ensenyava a interpretar monòlegs d'humor als artistes convidats al programa, entre els quals hi ha hagut polítics, periodistes i famosos diversos. Ja fora de la televisió, també.
El 24 de desembre de 2008 va realitzar al costat de Josema Yuste l'especial de la nit de Nadal de TVE. Un programa d'humor que incloïa les millors paròdies, sketches, imitacions i doblatges d'una parella que s'unia per primera vegada en televisió. Gairebé 3,6 milions d'espectadors, equivalents al 32,5% de l'audiència, van veure l'espai que va emetre La 1, que va ser el més vist el 24 de desembre. Aquest èxit va motivar que el 16 d'abril de 2009 s'estrenarà en format de programa setmanal amb el títol ¿Y ahora qué?.[3]
D'altra banda, durant la setmana del 20 al 24 de febrer de 2012 va celebrar els seus 15 anys de carrera professional en televisió en el seu programa Otra Movida, amb convidats especials i recopilacions dels seus millors moments en televisió. Otra Movida va acabar el 29 de juny de 2012.
Des de octubre de 2013 i fins a març de 2014 va ser un dels concursants de la tercera edició del programa Tu cara me suena[6] que emet Antena 3, en el va quedar en cinquena posició.
També des de novembre de 2013 i fins a maig de 2014 va col·laborar recurrentment en el programa d'Antena 3, Me resbala, acudint a tots i cadascun dels programes de la seva primera i segona temporada.
Entre novembre i desembre de 2015 va formar part del jurat de la segona edició del programa de TelecincoPequeños gigantes, que es va estrenar al novembre de 2015.
A principis de 2017, es va anunciar que el presentador i el còmic Dani Martínez tornarien a Cuatro per a presentar un programa d'humor en les sobretaules de la cadena anomenat Dani & Flo.
Més tard, ha estat recordat per RTVE juntament amb Josema Yuste en la cinquena temporada del programa de La 2 dels diumenges, Cómo nos reímos, en els dos primers capítols.