Duff McKagan va conèixer Slash i Steven Adler (que tocaven a Road Crew) per mitjà d'un anunci: "Es busca baixista que li agradi l'estil d'Aerosmith". Ell va respondre a l'anunci. Després de ser acceptat i començar a tocar, McKagan conèixer Axl Rose i Izzy Stradlin de Guns N' Roses. També integraven aquesta banda Tracii Guns i Rob Gardner, que més tard van anar de gira amb Hollywood Rose (ex banda d'Axl Rose i Izzy Stradlin) i Duff va cridar Steven Adler i Slash, que va acabar acceptant després d'haver estat rebutjat pel seu estil "bluesy".
Aquesta banda reconeguda mundialment va ser el començament de la carrera del baixista. Va pertànyer a Guns N' Roses fins a l'any 1998, any en què se'n va anar per "no aguantar més Axl Rose".
El 14 d'octubre de 2010 Duff va tornar a tocar amb la banda com convidat en el 02 Arena de Londres; segons Axl Rose va ser una coincidència: Al final del passadís del meu hotel se sentia una música molt forta i algú tocant i jo em preguntava que era allò, per la meva sorpresa Oh ... era Duff, McKagan va tocar amb el baix a You Could be Mine, la guitarra a Nice Boys i Knockin' on Heaven's Door i la pandereta i la guitarra que li va deixar Rhon Thal a Patience.
