تحليل دورة الخلية

تحليل دورة الخلية من خلال قياس محتوى الحمض النووي هي طريقة تستخدم التدفق الخلوي لتمييز الخلايا في المراحل المختلفة من دورة حياة الخلايا. قبل عملية التحليل، يتم جعل الخلايا قابلة للنفاذ ويتم معالجتها بصبغة فلورية مضيئة والتي تقوم بصباغة الحمض النووي (دي ان ايه DNA)، ومن الامثلة على هذه الصبغات يوديد البوربيديوم (بي آي PI). كثافة الإضاءة في الخلايا المصبوغة تتناسب مع كمية الحمض النووي DNA التي تحتويه طرديا، محتوى الحمض النووي في الخلية يحدد المرحلة اللتي تمر بها الخلية (G0 ,G1, S, G2, M). تنقسم المراحل السابقة إلى جزأين الأول يشمل (G0, G1, S) والثاني يشمل (G2, M) ويتضاعف محتوى الحمض النووي (DNA)في مرحلة S..و يمثل محتوى الحمض النووي (DNA)غالبا على رسم بياني ليقدم معلومات من خلال الترددات التي رسمت لكل مرحلة من مراحل دورة الخلية.

بعض الترددات غير الطبيعية يمكن ان تظهر في حال حصل تلف للخلية مهما كان نوعه، مثلا التلف في الحمض النووي (DNA) يمكن ان يقاطع تقدم دورة الخلية عند مراحل معينة، مثل هذا التهديد على تقدم دورة الخلية يمكن ان يؤدي اما إلى اصلاح الحمض النووي (DNA)أو إلى موت الخلية، اصلاح الحمض النووي (DNA)يمكن ان يؤدي إلى تحول الخلية الطبيعية إلى خلية سرطانية، اما موت الخلية فيحصل غالبا من خلال ما يسمى بالاستماتة أو موت الخلية المبرمج (طراز مورفولوجي لموت الخلايا المفردة المتميز بانكماش الخلية وتكثف الكروماتين وتشكل فقاعات هيولية ثم تتجزأ الخلية إلى شدف مرتبطة بالغشاء، ثم تبتلعها البلاعم حتى تختفي).المشاكل التي تواجه الخلية في مراحل (G0 و G1)غالبا ما تكون بسبب قلة المواد  الغذائية (مثل الحرمان من الامصال). بدا التعبير عن (تحليل دورة حياة الخلية) في عام 1969 في مختبرات لوس امالوس العلمية من قبل مجموعة من جامعة كاليفورنبا مستخدمين طريقة صبغة فيولجين، أول ببروتوكول لاستخدام صبغة يوديد البوربيديوم في تحليل دورة الخلية كان عام 1975 من خلال اوتار كريشان من كلية هارفرد الطبية وما زالت هذه الطريقة مستخدمة حتى وقتنا هذا.

تحليل دورة الخلية متعدد الوسائط يشمل، بالإضافة إلى قياس محتوى الحمض النووي، خصائص أخرى متعلقة بدورة الخلية، مثل القياس المتزامن لمحتوى الحمض النووي (DNA) والحمض الريبي النووي (RNA), أو قياس قابلية الحمض النووي (DNA) للتحطم عند رقم هيدروجيني (PH)منخفض من خلال استخدام صبغة الاكريدين البرتقالية، فتحدد مكونات مرحلة (G1Q, G1A, G1B) وتجعل من الممكن التمييز بين الخلايا في مرحلتي Sو Mو الخلايا المنقسمة. الخلايا في مرحلة (G1Q) تكون خاملة وموجودة بشكل مؤقت في دورة الخلية ويمكن ملاحظتها أيضا في (G0), الخلايا في مرحلة G1A تكون في طور النمو، اما في مرحلة G1B فتكون عبارة عن الخلايا تماما قبل دخولها مرحلة S ويكون نموها (سواء بكمية الحمض النووي الريبي RNA أو البروتين أو حجمها) مشابه للخلايا التي تبدا عملية تضاعف الحمض النووي. يمكن اكتشاف مكونات مشابهة في دورة الخلية من خلال التحليل متعدد الوسائط الذي يشمل قياس التعبير الذي يحدثه السايكلين دي 1 (CYCLIN D1) والسايكلين أي (CYCLIN E) والسايكلين ايه (CYCLIN A) والسايكلين بي 1 (CYCLIN B1). القياس المتزامن لمكونات الحمض النووي ووجود المركب الاولي 5-بروميد-2-دي اوكسي يوريدين من خلال التدفق الخلوي يعتبر  طريقة مفيدة بشكل خاص والتي يتم استخدامها بشكل واسع مؤخرا في تحليل الخلية في المختبر أو بالجسم الحي. مع ذلك تحليل وجود 5-ايثينيل-2-دي اوكسي ريودين أصبح الآن الطريقة المفضلة لتحديد وجود الخلايا المضاعفة للحمض النووي في مرحلة S.

خطوات عملية تحليل دورة الخلية

في حالة تم الصببغ باستخدام صبغة غير هوشست33342 (Hoechst 33342) فيجب اولا جعل الغشاء البلازمي للخلايا قابل للنفاذ ويتم ذلك من خلال وضعها في محلول يحافظ على درجة الرقم الهيدروجيني ويحتوي على منظف مخفف مثل تريتون اكس 100 (TRITON-X100)أو ان بي 40 (NP 40), أو من خلال تثبيت الخلايا في الايثانول، اغلب الصبغات باستثناء هوشست333422 (Hoechst 33342)غير قابلة  للنفاذ من خلال الغشاء البلازمي بالتالي تعتبر الخطوة السابقة ضرورية للنجاح الخطوة التي تليها، وهي صبغ الخلايا.

قبل أو خلال عملية الصبغ يتم معالجة الخلية بمحطمات للحمض النووي الريبي (RNase) للتخلص منه لان الصبغات ستصبغه كما ستصبغ الحمض النووي وبالتالي ستؤثر على النتيجة، الا في حالة استخدام صبغة الاكريدين البرتقالية لانها ستعطي الحمض النووي الريبي (RNA) اضاءة حمراء والحمض النووي (DNA) اضاءة خضراء، وفي حالة تم ازالة الحمض النووي الريبي (RNA) وتحطمت بعض اجزاء الحمض النووي (DNA) فانه سيصبغ الحمض النووي ثنائي الشريط (الغير محطم) بصبغة مختلفة عن الحمض النووي احادي الشريط (المحطم).و لان الخلايا تميل إلى الالتصاق ببعضها البعض يجب التخلص من الخلايا المتجمعة واستثناءها من عملية التحليل، لان الخلايا من مرحلة G0 و G1 لهما نفس كمية الحمض النووي والتي ستكون مجتمعة مساوية لكمية الحمض النووي الموجودة في خلية من مرحلة S أو M باتالي تعطي قراءة خاطئة.

اختبار نيوكليتي

اختبار نيوكليتي (Nicoletty Assay), والذي سمي باسم مخترعه الإيطالي الفيزيائي الدو نيوكليتي (Ildo Nicoletty), هو صورة معدلة عن عملية تحليل دورة حياة الخلية، والذي يقيس عدد الخلايا المستميتة (في عملية الموت المبرمج أو الاستماتة) ويتم ذلك من خلال قياس ما يسمى ب (خلايا G0/G1 الثانوية) والتي تحتوي على كمية اقل من الكروموسومات التي من المفترض تواجدها داخل الخلية في مرحلتي G0 و G1 (يجب ان تكون الكروموسومات في هذه المراحل مضاعفة 2N), مثل هذه الخلايا يمكن ان تنتج من خلال تحطيم الحمض النووي (DNA) بواسطة محطمات الحمض النووي (DNase) خلال عملية الاستماتة بالتالي تكون نواة الخلية تحتوي على اقل من الكمية المفترض تواجدها من الكوروموسومات، مما سسيؤدي إلى حدوث قفزة في الرسم البياني الخاص بالخلايا المصبوغة المضيئة بالتالي يحدد عدد الخلايا المستميتة. تم تطوير هذه الطريقة من خلال نيكوليتي ومساعديه في كلية الطب بجامعة بيروجيا. من الجدير بالذكر ان الجزيئات التي يتم قياسها من ضمن القفزة التي سبق ذكرها والتي تحتوي على اقل من 5% من كمية الحمض النووي المفروض تواجدها في خلايا G1 و G0 الثانوية تعتبر اجسام مسستميتة وليست خلايا مستميتة.

مراجع

  1. Van Dilla MA, Trujillo TT, Mullaney PF, Coulter JR (14 March 1969). "Cell Microfluorometry: A Method for Rapid Fluorescence Measurement". Science. 163 (3872): 1213–1214. doi:10.1126/science.163.3872.1213. PMID 5812751
  2. Krishan A. (July 1975). "Rapid flow cytofluorometric analysis of mammalian cell cycle by propidium iodide staining". The Journal of Cell Biology. 66 (1): 188–193. doi:10.1083/jcb.66.1.188. PMC 2109516. PMID 49354.
  3. Darzynkiewicz Z, Traganos F, Melamed MR. (1980) New cell cycle compartments identified by multiparameter flow cytometry. Cytometry 1:98-108. PMID 6161370
  4. Darzynkiewicz Z, Gong JP, Juan G, Ardelt B, Traganos, F. (1996) Cytometry of cyclin proteins. Cytometry 25:1-13, PMID 8875049 doi:10.1002/(SICI)1097-0320(19960901)25:1<1::AID-CYTO1>3.0.CO;2-N
  5. Gray JW, Dolbeare F, Pallavicini MG, Beisker W, Waldman F. (1986) Cell cycle analysis using flow cytometry. Int J Radiat Biol Relat Stud Phys Chem Med. Feb;49(2):237-55. PMID 3510993.
  6. Buck SB, Bradford J, Gee KR, Agnew BJ, Clarke ST, Salic A. (2008) Detection of S-phase cell cycle progression using 5-ethynyl-2'-deoxyuridine incorporation with click chemistry, an alternative to using 5-bromo-2'-deoxyuridine antibodies. Biotechniques. Jun;44(7):927-9. doi: 10.2144/000112812. PMID 18533904
  7. Vindeløv LL, Christensen IJ, Nissen NI (March 1983). "A detergent-trypsin method for the preparation of nuclei for flow cytometric DNA analysis". Cytometry. 3 (5): 323–327. doi:10.1002/cyto.990030503. PMID 6188586.
  8. Sharpless T, Traganos F, Darzynkiewicz Z, Melamed MR. (1975) Flow cytofluorimetry: discrimination between single cells and cell aggregates by direct size measurements. Acta Cytol. 19(6):577-81. PMID 1108568
  9. Wersto RP, Chrest FJ, Leary JF, Morris C, Stetler-Stevenson MA, Gabrielson E (15 October 2001). "Doublet discrimination in DNA cell-cycle analysis". Cytometry. 46 (5): 296–306. doi:10.1002/cyto.1171. PMID 11746105.
  10. Nicoletti I, Migliorati G, Pagliacci MC, Grignani F, Riccardi C (3 June 1991). "A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry". Journal of Immunological Methods. 139 (2): 271–279. doi:10.1016/0022-1759(91)90198-O. PMID 1710634.
  11. Riccardi C, Nicoletti I (9 November 2006). "Analysis of apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry". Nature Protocols. 1 (3): 1458–1461. doi:10.1038/nprot.2006.238. PMID 17406435
  12. Darzynkiewicz Z, Bedner E, Traganos F. (2001) Difficulties and pitfalls in analysis of apoptosis. Methods Cell Biol 63:527-559, PMID 11060857

Read other articles:

Cheongganjeong

Cheongganjeong karya Jeong Seon. Cheongganjeong (Pendopo Cheonggan / 청간정 / 淸澗亭) adalah salah satu dari Delapan Pemandangan Indah di Gwandong di Korea.[1] Cheongganjeong adalah salah satu dari delapan tempat terindah untuk melihat matahari terbit di Gunung Seorak. Berlokasi di 81 Cheonggan-ri Toseong-myeon dekat Laut Timur, Pendopo Cheonggan adalah bangunan beratap genting berukuran sedang yang berada di atas batu karang dekat Sungai Cheonggan yang berhulu di Gunung Seorak....

 

 

Martin Heidegger dan Nazisme

Martin Heidegger sekitar tahun 1960. Filsuf Martin Heidegger bergabung dengan Partai Nazi (NSDAP) pada tanggal 1 Mei 1933, sepuluh hari setelah diangkat sebagai Rektor Universitas Freiburg. Satu tahun kemudian, pada April 1934, ia mundur dari jabatan rektor dan tidak lagi turut serta dalam pertemuan-pertemuan Partai Nazi, namun tetap menjadi anggota hingga partai tersebut dibubarkan setelah berakhirnya Perang Dunia II. Program denazifikasi yang diadakan setelah Perang Dunia II membuat Heidegg...

 

 

Ford F-Series (generasi ketujuh)

Artikel utama: Ford F-SeriesGenerasi ketujuhFord F-150 Custom XLT 1980InformasiProdusenFordMasa produksiSeptember 1979–1986[1] 1980–1986 (Meksiko dan Venezuela)1981–1987 (Argentina: light-duty)1982–1990 (Argentina: Ford medium duty)Model untuk tahun1980–1986PerakitanAmerika Utara: Dearborn, Michigan (Ford Rouge Complex)Louisville, Kentucky (Louisville Assembly)St. Paul, Minnesota (Twin Cities Assembly)Claycomo, Missouri (Kansas City Assembly)Norfolk, Virginia (Norfolk A...

Yu dengan makron

Huruf KirilYu dengan makron Alfabet KirilHuruf SlaviaАА́А̀А̂А̄ӒБВГҐДЂЃЕЕ́ÈЕ̂ЁЄЖЗЗ́ЅИИ́ЍИ̂ЙІЇЈКЛЉМНЊОŌПРСС́ТЋЌУУ́ У̀У̂ӮЎФХЦЧЏШЩЪЫЬЭЮЯHuruf non-SlaviaӐА̊А̃Ӓ̄ӔӘӘ́Ә̃ӚВ̌ҒГ̑Г̣Г̌ҔӺҒ̌ӶД̌Д̣Д̆ӖЕ̄Е̃Ё̄Є̈ӁҖӜҘӞЗ̌З̱З̣ԐԐ̈ӠӢИ̃ҊӤҚӃҠҞҜК̣ԚӅԮԒӍӉҢԨӇҤО́О̀О̆О̂О̃ӦӦ̄ӨӨ̄Ө́Ө̆ӪҨԤР̌ҎҪС̣С̱Т̌Т̣ҬУ̃Ӱ Ӱ́Ӱ̄ӲҮҮ́ҰХ̣Х̱Х̮�...

 

 

Élections législatives de 2017 dans la Marne

2012 2022 Élections législatives de 2017 dans la Marne 5 sièges de députés à l'Assemblée nationale 11 et 18 juin 2017 Type d’élection Élections législatives Campagne 22 mai au 10 juin12 juin au 16 juin Corps électoral et résultats Inscrits 381 602 Votants au 1er tour 180 848   47,39 %  8,6 Votes exprimés au 1er tour 177 675 Votes blancs au 1er tour 2 274 Votes nuls au 1er tour 899 Votants au 2d tour 159 190   41,72 % V...

 

 

Florentin Smarandache

Florentin Smarandache Dr. Florentin Smarandache (lahir pada 10 Desember 1954) adalah Profesor Matematika Universitas New Mexico di Amerika Serikat (AS). Dia telah menerbitkan lebih dari 75 buku dan 100 artikel dan sejumlah buklet di bidang matematika, fisika, filsafat, psikologi, dan sastra. Di bidang matematika risetnya mencakup sejumlah teori, geometri non-Euclidean, geometri sintetis, struktur aljabar, statistik, logika neutrosofi dan seperangkat generalisasi intuistik logika fuzzy (yakni ...

Kejuaraan Futsal AFC 2005

Kejuaraan Futsal AFC 2005Informasi turnamenTuan rumahVietnamJadwalpenyelenggaraan22 May – 4 JuneJumlahtim peserta24 (dari 1 konfederasi)Tempatpenyelenggaraan2 (di 1 kota)Hasil turnamenJuara Iran (gelar ke-7)Tempat kedua JepangStatistik turnamenJumlahpertandingan78Jumlah gol720 (9,23 per pertandingan)Pemain terbaik Kenichiro KogurePencetak golterbanyak Vahid Shamsaei (23)← 2004 2006 → Kejuaraan Futsal AFC 2005 diadakan di Kota Ho Chi Minh, Vietnam dari ta...

 

 

Lobu Hole, Habinsaran, Toba

Lobu HoleDesaPeta lokasi Desa Lobu HoleNegara IndonesiaProvinsiSumatera UtaraKabupatenTobaKecamatanHabinsaranKode pos22383Kode Kemendagri12.12.04.2017 Luas12,28 km²Jumlah penduduk589 jiwa (2016)Kepadatan47,96 jiwa/km² Lobu Hole adalah salah satu desa di Kecamatan Habinsaran, Kabupaten Toba, Provinsi Sumatera Utara, Indonesia. Lobu Hole diapit oleh dua Sungai yaitu Sungai Simalopak dan Sungai Pancaruan. Kedua Sungai ini kemudian menyatu di Hite Arsam, sebelum akhirnya mengalir dan menya...

 

 

Pattern

Regularity in sensory qualia or abstract ideas For other uses, see Pattern (disambiguation). Various examples of patterns A pattern is a regularity in the world, in human-made design,[1] or in abstract ideas. As such, the elements of a pattern repeat in a predictable manner. A geometric pattern is a kind of pattern formed of geometric shapes and typically repeated like a wallpaper design. Any of the senses may directly observe patterns. Conversely, abstract patterns in science, mathem...

Crabwalk

This article has multiple issues. Please help improve it or discuss these issues on the talk page. (Learn how and when to remove these template messages) This article is written like a personal reflection, personal essay, or argumentative essay that states a Wikipedia editor's personal feelings or presents an original argument about a topic. Please help improve it by rewriting it in an encyclopedic style. (April 2022) (Learn how and when to remove this message) This article needs additional c...

 

 

The Block (Brack)

Painting by John Brack The BlockArtistJohn BrackYear1954Mediumoil on canvasDimensions59.0 cm × 71.5 cm (23.2 in × 28.1 in)LocationNational Gallery of Victoria, Melbourne The Block is a 1954 painting by Australian artist John Brack. The painting depicts the interior of an empty butcher's shop, including the eponymous butcher's block.[1] It is one of a series of paintings—including The Barber's Shop (1952), The Fish Shop (1955) and Men's Wea...

 

 

IBM and the Holocaust

2001 book by Edwin Black This article is about the book. For the historical background, see IBM during World War II. IBM and the Holocaust Paperback expanded edition coverAuthorEdwin BlackOriginal titleIBM and the Holocaust: The Strategic Alliance between Nazi Germany and America's Most Powerful CorporationCountryUnited StatesLanguageEnglishGenreNon-fictionPublisherDialog PressPublication date2001, 2002, 2008, 2012 (expanded edition with documents), and 2021 (updated 20th anniversary)ISB...

Denisko uprising

1779 Polish rebellion This article includes a list of references, related reading, or external links, but its sources remain unclear because it lacks inline citations. Please help improve this article by introducing more precise citations. (August 2014) (Learn how and when to remove this message) Denisko UprisingDate1797, June 26 - end of JulyLocationPokucie, Podole and Bukowina, Austrian Poland. (modern Ukraine)Result Austrian victoryBelligerents Polish insurgents Support: Ottoman Empir...

 

 

Charles A. Sprague

22nd Governor of Oregon Charles A. Sprague22nd Governor of OregonIn officeJanuary 9, 1939 – January 11, 1943Preceded byCharles H. MartinSucceeded byEarl Snell Personal detailsBorn(1887-11-12)November 12, 1887Lawrence, KansasDiedMarch 13, 1969(1969-03-13) (aged 81)Salem, OregonResting placeMount Crest Abbey Mausoleum, Salem, OregonPolitical partyRepublicanSpouseBlanche ChamberlainAlma materMonmouth CollegeProfessionPolitician Charles Arthur Sprague (November 12, 1887 – Ma...

 

 

Great Observatories program

Series of NASA satellites Four Great Observatories NASA's series of Great Observatories satellites are four large, powerful space-based astronomical telescopes launched between 1990 and 2003. They were built with different technology to examine specific wavelength/energy regions of the electromagnetic spectrum: gamma rays, X-rays, visible and ultraviolet light, and infrared light. The Hubble Space Telescope (HST) primarily observes visible light and near-ultraviolet. It was launched in 1990 a...

Robert Laurent

American sculptor Robert LaurentMother and Child, ca. 1924, alabaster relief in wood frame, Smithsonian American Art Museum, Gift of John N. Stern, 1996.89A-BBornJune 29, 1890Concarneau, FranceDiedApril 20, 1970Cape Neddick, MaineEducationBritish AcademyKnown forAmerican Pioneer of Direct Carving. Co-Founder of The Ogunquit Summer School of Graphic Arts (Maine)Notable workSculpture at Radio City Music HallMovementModernismSpouseMimi CaraesAwardsNational Institute of Arts & Letters, N...

 

 

Hassocks

Questa voce sull'argomento centri abitati del West Sussex è solo un abbozzo. Contribuisci a migliorarla secondo le convenzioni di Wikipedia. Hassocksparrocchia civileHassocks – Veduta LocalizzazioneStato Regno Unito    Inghilterra RegioneSud Est Contea West Sussex DistrettoMid Sussex TerritorioCoordinate50°55′N 0°09′W50°55′N, 0°09′W (Hassocks) Superficie10,88 km² Abitanti6 821 (2001) Densità626,93 ab./km² Altre informazioniCod. ...

 

 

Pierre de Fermat

French mathematician and lawyer (1607-1665) Fermat redirects here. For other uses, see List of things named after Pierre de Fermat. Pierre de FermatPierre de Fermat, 17th century painting by unknown authorBornc. 1607Beaumont-de-Lomagne, FranceDied(1665-01-12)12 January 1665(aged 57)Castres, FranceEducationUniversity of Orléans (BCL, 1626)Known forContributions to number theory, analytic geometry, probability theoryFolium of DescartesFermat's principleFermat's little theoremFermat's Last...

Diocese

Christian district governed by a bishop This article is about ecclesiastical dioceses. For the administrative entities in the Roman Empire, see Roman diocese. Diocesan redirects here. For other uses, see Diocesan (disambiguation). This article needs additional citations for verification. Please help improve this article by adding citations to reliable sources. Unsourced material may be challenged and removed.Find sources: Diocese – news · newspapers · books �...

 

 

Parc naturel régional Jura vaudois

Parc naturel régional Jura vaudoisLa vallée de Joux, le cœur du parcGéographiePays SuisseCanton VaudDistricts Jura-Nord vaudois, Morges, NyonCoordonnées 46° 34′ 00″ N, 6° 16′ 00″ EVille proche VallorbeSuperficie 530,6 km2Population 31977AdministrationCatégorie UICN VCréation 1973, 2010Patrimonialité Parc naturel régionalParc d'importance nationaleAdministration Association du Parc naturel régional Jura vaudoisSite web parcjuravaudois.ch G...